【求助】western显影出现白色条带，背景超黑！**！

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标题:【求助】western显影出现白色条带，背景超黑！**！

skytree[使用道具]
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发表于 2013-6-1 13:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各路western大神，小弟刚学习western，最近接western显影接连出现白色条带，第二张图是目的的，出现白色条带，不知是否为目的蛋白（75KD），第三张图是相应的actin，第一张是昨天刚跑的，也是白色条带。求大神给我一根稻草！跪谢！！

ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-6-1 13:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

抗体太浓了，降低一抗和二抗的浓度。

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2013-6-1 13:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

白色的应该不是目的条带，理论上目的条带都是黑色的，你的背景有些脏，主要看看是不是一抗的原因，建议延长下封闭时间试一试，还有就是看一下是否2抗加错了没？如果延长封闭时间还没有用的话，就建议你投诉一抗。

skytree[使用道具]
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发表于 2013-6-1 13:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ukonptp 于 2013-6-1 13:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
抗体太浓了，降低一抗和二抗的浓度。

我用的都是抗体说明书上的推荐比例第二张推荐1:1000-1：10000 我就选了前者，第一张图的抗体推荐1:800，我用1:1000稀释的，二抗的话有个老师说二抗稀释比要和一抗一样。我昨天把第一张图的抗体稀释比改成1:1500，结果还是差不多啊

skytree[使用道具]
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发表于 2013-6-1 13:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 redbutterfly 于 2013-6-1 13:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

白色的应该不是目的条带，理论上目的条带都是黑色的，你的背景有些脏，主要看看是不是一抗的原因，建议延长下封闭时间试一试，还有就是看一下是否2抗加错了没？如果延长封闭时间还没有用的话，就建议你投诉一抗。 ...

谢谢指点！我是用5%的脱脂奶粉摇床，室温封闭一个半小时。第一张图的抗体是Abcam的，rabbit polyclonal to Dopamine D2 Recepor,是兔抗的吧第二张图的抗体是eptimics的，rabbit monoclonal antibody，也是兔抗的，我的二抗是抗兔的HRP，稀释比和一抗一致。我看坛子上有人说二抗基本是1:5000，我正犹豫要不要试一下。

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2013-6-1 13:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我二抗一般1：10000.1：5000也可以。

duoduo[使用道具]
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发表于 2013-6-1 13:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用的都是抗体说明书上的推荐比例第二张推荐1:1000-1：10000 我就选了前者，第一张图的抗体推荐1:800，我用1:1000稀释的，二抗的话有个老师说二抗稀释比要和一抗一样。我昨天把第一张图的抗体稀释比改成1:1500，结果还是差不多啊

================

二抗可以1：5000
1抗1：1000或2000
再试试

avi317[使用道具]
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发表于 2013-6-1 13:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图都不懒得看，二楼说得对，一抗二抗浓度高了。降个10倍再说。

哥们你说的二抗和一抗的稀释比要保持一致...这话好吓人做实验得灵活调整，你这样一板一眼的按照说明书上说的做是不行的，说明书给你的最多是参考的作用。

另外或许你的ECL太猛..换个柔和点的试试。

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发表于 2013-6-1 13:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不知道有没有阳性对照，感觉白带都不是目的带，有可能是杂带

langlang[使用道具]
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发表于 2013-6-1 13:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也有出现这个状况！背景超黑然后条带全部变成白色…

老师还说是我洗膜没洗干净…

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