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标题:【求助】为什么marker只跑出三条带？

pulala[使用道具]
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发表于 2013-6-1 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么marker只跑出三条带？


我用的是上海生化所的低分子量标准蛋白，Bio-Rad电泳系统，电压150V，指示剂到达距底部约1cm处终止电泳，但是marker的六条带只显出了三条，在指示剂处颜色较浓，是否可能是较低分子量蛋白的条带呢？电泳的电压是否过高？浓缩胶和分离胶的电压是不是分别设定会好一些？
谢谢。
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小游abc[使用道具]
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发表于 2013-6-1 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的胶浓度是多大，marker只显出三条带也太少了，如果不是上样量不足的话就是蛋白降解了。样品过浓缩胶的时候电压小一点，然后再调大，这样得到的条带更漂亮。
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dog002[使用道具]
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发表于 2013-6-1 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

提高分离胶的浓度，marker可以显示出更多的条带。浓缩胶和分离胶的电压最好分开，浓缩胶得电压小一点，浓缩胶得电压大一些。
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uuooii[使用道具]
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发表于 2013-6-1 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的浓缩胶和分离胶的电压分别为100V、120V，除了蛋白降解外，可能原因是：跑的时间太久，低分子的蛋白Marker跑丢了；染色时间太久，你过夜了吗？时间太长可能会造成蛋白条带弥散，你脱色后的背景是不是很高；浓缩胶不要太短。
仅供参考！
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pulala[使用道具]
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发表于 2013-6-1 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分离胶的浓度是10％，待测蛋白质的分子量为45kd和55kd。染色没有过夜，脱色后的背景并不高，电泳时间40分钟。我打算明天把电压调小再试试。谢谢大家的参考
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8s5g[使用道具]
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发表于 2013-6-1 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分离胶聚合时间不够。我也遇过此问题
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xyw5[使用道具]
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发表于 2013-6-1 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的多肽marker也是只显示3条带。6kb下的两条没了，增大marker加样量也不幸。
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loli[使用道具]
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发表于 2013-6-1 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我谈一下我的看法的经验:

我曾经用过并且一直在用上海生化所的低分子量标准蛋白，我用的10%分离胶，多数跑出来的MARKER是5个（实际是6个），只有一两次是3个，我用的是定电流24mA或32mA，后来分析了一下原因，其它都很正常，唯一可能就是分离胶的浓度低，不能使低分子量的蛋白质跑出来。我就用12.5%的分离胶，电流还是24mA或32mA，堆积胶的电流是分离胶电流的一半。以后跑出来的胶都很好，MARKER也正常为6条带。
你的情况与电压有关，但不是太大，你应关注的是分离胶的浓度，建议你试一下12.5%的分离胶或更高浓度一点的分离胶！

另外，你最好附图就更明晰一点！
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2013-6-1 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉的以上各位说的都有道理，我补充一点，你还要检查一下你的上样缓冲液和染液，因为上海生化所的低分子量标准蛋白各带的浓度不是一样的，有的浓度低，如果染液时间长的话可能就染色不出来了。
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2013-6-1 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也遇到类似情况，后来发现与试剂有关，用进口的吧。
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