【求助】请教去除溶液ATP的方法

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标题:【求助】请教去除溶液ATP的方法

applebook=213[使用道具]
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发表于 2013-6-3 15:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

为了将蛋白磷酸化，在溶液中加入了ATP，为了进一步反应，需要将ATP彻底的除去。请问应该采用什么分离手段，目前手头上有分子筛，Q柱和SP柱，不知道分子筛的分离效果如何，请各位老师指教！

plaa[使用道具]
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发表于 2013-6-3 15:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 applebook=213 的帖子

分子筛可以，唯一的缺点是会稀释样品

还有个办法就是用超滤-稀释这个流程来换液

NBA[使用道具]
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发表于 2013-6-3 15:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还可以：
1 用 Apyrase 处理。
2 用 Hexokinase + glucose 处理。

applebook=213[使用道具]
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发表于 2013-6-3 15:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 plaa 于 2013-6-3 15:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
分子筛可以，唯一的缺点是会稀释样品

还有个办法就是用超滤-稀释这个流程来换液

谢谢您的解答。
选择分子筛的话，稀释样品没有什么问题，再超滤浓缩就可以了。但是不知道分子筛能不能完全的除去ATP，效率能有多高。
超滤浓缩的方法，蛋白的损失很大，而且耗时也很长。

applebook=213[使用道具]
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发表于 2013-6-3 15:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 NBA 于 2013-6-3 15:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
还可以：
1 用 Apyrase 处理。
2 用 Hexokinase + glucose 处理。

您好，感谢您的解答。
我下一步的实验要尽量完全的排除磷酸根的影响，所以才要除去溶液中的ATP，这样处理的话无机磷酸根还是难以直接排除，而且这几种酶我的实验室目前还没有。

plaa[使用道具]
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发表于 2013-6-3 15:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 applebook=213 于 2013-6-3 15:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

谢谢您的解答。
选择分子筛的话，稀释样品没有什么问题，再超滤浓缩就可以了。但是不知道分子筛能不能完全的除去ATP，效率能有多高。
超滤浓缩的方法，蛋白的损失很大，而且耗时也很长。 ...

柱子越长, 脱盐效果越好但是样品峰会扩散. 一般来说10cm的柱子大约能去掉95%的ATP，20cm则几乎检测不到原有的小分子。

ha111[使用道具]
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发表于 2013-6-3 15:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用G25脱盐柱可以去除，上样量可达20-30%

applebook=213[使用道具]
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发表于 2013-6-3 15:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 plaa 于 2013-6-3 15:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

柱子越长, 脱盐效果越好但是样品峰会扩散. 一般来说10cm的柱子大约能去掉95%的ATP，20cm则几乎检测不到原有的小分子。

你好，我最后用分子筛进行了纯化，效果挺好的，谢谢您的指导。

applebook=213[使用道具]
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发表于 2013-6-3 15:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 ha111 于 2013-6-3 15:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

用G25脱盐柱可以去除，上样量可达20-30%

您好，脱盐柱是个不错的选择，但是我们实验室目前还没有脱盐柱，而且老板目前也没有购进的计划。脱盐柱的效果是不是会比分子筛更好一些呢？

sunnyB[使用道具]
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发表于 2013-6-3 15:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

脱盐柱其实就是一种分辨率很差的分子筛

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