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标题:【求助】marker跑不开，对目的蛋白的分子量确定...

jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2013-6-3 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】marker跑不开，对目的蛋白的分子量确定...


我用的是10%分离胶，4%浓缩胶，marker分子量分别为117kd、90kd、49kd、35kd、26kd、19kd
最近跑胶时发现marker六条带只能显出前四条，而且第一条离分离胶顶端约1cm才显现。第五条可以显现但是和第四条位置很近没有分开，而最后一条根本就没有出来。
我的目的蛋白是90kd，内参是36kd的GAPDH，照理来说他们的位置应该是分得比较开的，但是现在发现他们的条带位置也比较近，是否应该换浓度比较高的分离胶？
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vera+[使用道具]
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发表于 2013-6-3 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想应该是用浓度低的分离胶吧？
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vera+[使用道具]
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发表于 2013-6-3 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不对，还是用高的。
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2013-6-3 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ACR.BIS胶是自己配的吗，有可能配错了，前面小分子的带出来了，后面大分子没出来，胶的浓度挺大的，你电泳的时间太短了
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qqq111[使用道具]
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发表于 2013-6-3 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用7.5%的分离胶试试，应该可以解决问题。另外，在保证内参没跑出去的情况下，时间可以稍微久一点。
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niangao1980[使用道具]
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发表于 2013-6-3 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你要求的蛋白分子量差异很大,不建议都用10%的胶.而且好像你的浓缩胶带宽是不是太宽了,分离胶带宽太窄. 电泳时间似乎也太长了.
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发表于 2013-6-3 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

10%够了，分离胶浓度越大只能把小分子蛋白分开，基本上43以上很难分开（用伯乐的玻璃板）。10%就是分不开26KD的蛋白了，所以你的小分子MARKER就没有了。10%的如果分不开90KD和36KD只能说明分离胶浓度太高。如果想分开只能降分离胶浓度，最低8%，8%一下就分不开GAPDH了。建议检查制胶试剂盒。PH值和丙烯酰胺

祝好运~
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2013-6-3 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
ACR.BIS胶是自己配的吗，有可能配错了，前面小分子的带出来了，后面大分子没出来，胶的浓度挺大的，你电泳的时间太短了

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胶母液是自己配的，然后我跑电泳已经是尽可能让溴酚蓝跑到胶的最底部了，所以电泳时间应该不是问题…
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2013-6-3 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你要求的蛋白分子量差异很大,不建议都用10%的胶.而且好像你的浓缩胶带宽是不是太宽了,分离胶带宽太窄. 电泳时间似乎也太长了.

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我就是觉得分不开于是制胶是特意让分离胶做得宽些…但是也没用
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jiushikeshui371[使用道具]
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 小中大

昨天试了一下分别用10%和12%的胶跑marker，发现用12%的胶marker可以跑出5条带（最后一个19kd的显不出来，不过问题应该不大）
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