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标题:【求助】考马斯亮蓝G250配制出来怎么总是蓝色?

free[使用道具]
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【求助】考马斯亮蓝G250配制出来怎么总是蓝色?

小弟要用考马斯亮蓝G250溶液测蛋白质含量,但是在配制考马斯亮蓝溶液这里出了问题
我是按照主流的方法配的,95%酒精+100mg考G250+100ML 85%磷酸,定容到1000ml
小弟在配制的时候,考马斯亮蓝先溶于酒精是蓝色,但在加入磷酸后,就变成棕红色
最后在定容的时候水还只加到一半,又变成蓝色了
正确的应该是棕红色吧?
各位有经验的大侠指教下,用此法配制考马斯亮蓝G250染色液的时候,每一步的颜色变化是什么样的?第一步溶于酒精,变成蓝色正常吗?
我的容器都反复冲洗过了呀,而且定容的水也是超纯水
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fsdd817[使用道具]
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我配溶液的步骤的和楼主的一样,也是先加入酒精使G-250全部溶解,再加磷酸和水,最后配出来的不是那种纯蓝色,而象是那种墨蓝色,没有我一直以为我配的就是正常的颜色,难道我错了??楼主为什么说棕红色才是正确的?何以又知道你配出的蓝色不对呢?是不是你用自己配的那个Bradford工作液测定出来的蛋白浓度通过实验证明与实际浓度相差很大啊?
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KGZ564[使用道具]
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The suffix "R" in the name of Coomassie Brilliant Blue R-250 is an abbreviation for Red as the blue colour of the dye has a slight reddish tint. For the "G" variant the blue colour has a more greenish tint.(from wikipedia)
The colour of the two dyes depends on the acidity of the solution. The "G" form of the dye has been studied in detail.At a pH of less than 0 the dye has a red colour with an absorption maximum at a wavelength of 470 nm. At a pH of around 1 the dye is green with an absorption maximum at 620 nm while above pH 2 the dye is bright blue with a maximum at 595 nm.
If you have more knowledge of the Coomassie Brilliant Blue G-250,you will assure that you have got the right color.8D


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小弟要用考马斯亮蓝G250溶液测蛋白质含量,但是在配制考马斯亮蓝溶液这里出了问题
我是按照主流的方法配的,95%酒精+100mg考G250+100ML 85%磷酸,定容到1000ml
小弟在配制的时候,考马斯亮蓝先溶于酒精是蓝色,但在加入磷酸后,就变成棕红色
最后在定容的时候水还只加到一半,又变成蓝色了
正确的应该是棕红色吧?
各位有经验的大侠指教下,用此法配制考马斯亮蓝G250染色液的时候,每一步的颜色变化是什么样的?第一步溶于酒精,变成蓝色正常吗?
我的容器都反复冲洗过了呀,而且定容的水也是超纯水
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正确的G250配出来颜色是棕色的,放时间长了局部可能变蓝;加入磷酸后应该是蓝色的;这种配置过程中最后变成蓝色的现象我还没遇到过。
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xyw5[使用道具]
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局部偏酸产生的。
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有可能是水或者器皿不洁净,有蛋白污染了
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98776langtao[使用道具]
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小弟要用考马斯亮蓝G250溶液测蛋白质含量,但是在配制考马斯亮蓝溶液这里出了问题
我是按照主流的方法配的,95%酒精+100mg考G250+100ML 85%磷酸,定容到1000ml
小弟在配制的时候,考马斯亮蓝先溶于酒精是蓝色,但在加入磷酸后,就变成棕红色
最后在定容的时候水还只加到一半,又变成蓝色了
正确的应该是棕红色吧?
各位有经验的大侠指教下,用此法配制考马斯亮蓝G250染色液的时候,每一步的颜色变化是什么样的?第一步溶于酒精,变成蓝色正常吗?
我的容器都反复冲洗过了呀,而且定容的水也是超纯水

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这个很正常的啊,主要是磷酸的比例要摸索,一般还要加一些去污剂什么的,这个都是商业机密,自己配有点难度。
这个也不是很贵,自己买点用事可行的。
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qhyu[使用道具]
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上面的英文兄说的很清楚
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最后怎么才能得到棕红色的溶液呢?我最后配出来就是那种墨蓝色,这样测蛋白含量肯定不准了,求助各位高手啊
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BUK[使用道具]
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我今天按常规处方也配了两次,最后得到都是蓝色,后来往里面再多加点磷酸它就变棕红色了,应该是磷酸的比例需要摸索吧
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