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标题:[未解决]请教：waters WCX小柱洗脱步骤有什么经验吗？

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
ccf335[使用道具]
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发表于 2009-12-24 09:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教：waters WCX小柱洗脱步骤有什么经验吗？

请教：有哪位大侠用过waters WCX的固相小柱？在活化、淋洗还有洗脱的步骤中有什么经验吗？比如速度，PH什么的。。。谢谢！！！
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zhufangwei[使用道具]
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发表于 2009-12-24 19:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有操作说明的，直接按照说明书上操作是完全没有问题的
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  • miracle   2009-12-24 21:08  可用分  +3   谢谢您的热心应助！欢迎您常来！ ...
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ross_racheal[使用道具]
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发表于 2009-12-25 09:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对于这款适于强碱性化合物分离的小柱没有用过，但我用过MCX和HLB的。在分离中，最主要的还是洗脱速度，对于淋洗时，保证外界压力在10一下。而在洗脱的过程中，就让它慢慢流下来，最后再施加外力将其彻底洗出。
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ccf335[使用道具]
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发表于 2009-12-25 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那么请教LS，用MCX小柱的时候，活化的PH是多少？还是直接就是甲醇和水活化的？我之前用的就是MCX的小柱,但是提取回收率较低，不到50%的样子，waters的工程师来了之后建议我换用WCX，结果试用之后发现上样就挂不住，郁闷啊！
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ross_racheal[使用道具]
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发表于 2009-12-25 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的化合物的酸碱性是什么？你处理样品的程序是什么 样子的？你发上来，这样我会根据你的做法分析。
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ccf335[使用道具]
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发表于 2009-12-25 13:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做的是TTX，PKa8.6，我的基质是血样，目前先是用的标准品做的。处理过程是0.5ml血样+1.5ml1%乙酸甲醇溶液混旋，离心，取上清液冻融之后再次离心，取上清液过固相小柱。固相萃取的过程是：先甲醇、水活化，然后上样，再分别经过乙腈、甲醇、水淋洗之后，用0.2M HCL/20%MeOH（ph1）洗脱，用量都是1ml。

请指教，谢谢。
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ross_racheal[使用道具]
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发表于 2009-12-25 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议：首先没必要使用先沉淀蛋白后SPE的方法，固相萃取能够很好的去除内源性物质的干扰。你参考一下这款小柱的说明书，将样品制备再重新优化一下。
其次是在淋洗的时候，不要使用纯乙腈和甲醇，使用含有一定比例水相的甲醇溶液，我想你的回收率低，可能这部损失比较大。
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michael_b_rex[使用道具]
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发表于 2009-12-27 09:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同意，血样可以经有机溶剂沉淀下蛋白。过SPE小柱时，淋洗时要摸索下淋洗液中有机相和水相的比例，给能保证去除杂质，又能获得较高的回收率。这一步要摸索。
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eedc-dcnge[使用道具]
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发表于 2009-12-27 09:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
waters WCX 一般是用1mL甲醇和1mL水活化和平衡，然后上样，然后用1mL水
和1mL甲醇清洗小柱，最后用洗脱液洗脱目标组分。
萃取速度一般不超过1mL/min.
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ccf335[使用道具]
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发表于 2009-12-27 13:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家一再耐心的指教
关于上样的基质，以前我也用血样直接稀释了就上样的，但是最后的洗脱液比较脏，明显有颜色，液质做了之后很容易脏，在离子源外面的盖子上明显的黑了，另外就是喷雾针会弄堵。
在整个过程中，从上样开始，我都收集了各步骤的液体，吹干之后同样用LC液定容，然后液质分析。从分析的结果来看各个步骤均没有目标物质，这样能不能说明中间步骤是没有损失的？
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