蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】尿素怎么不溶解?

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】尿素怎么不溶解?

王小主[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107991
精华 0
积分 165
帖子 70
信誉分 100
可用分 1096
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
1
 

【求助】尿素怎么不溶解?


做双向电泳的,自己配裂解液和上样液,
裂解液配方:
尿素 7M
硫脲 2M
CHAPS 4%
二次水 至20ml
使用前加DTT至65mM,tris至40mM,PMSF至1mM

上样液配方:
尿素 8M
CHAPS 2%
1%溴酚蓝 0.002%
二次水 至10ml
使用前加DTT至18mM,IPG buffer至0.5%

由于都含有尿素,特别难溶解,好像含有尿素的温度不能超过37度,就在磁力搅拌器上一直搅着,发现过了一两个小时还没溶解,怎么回事么?中间还在34度左右水浴锅里水浴过,还是没溶解,溅在烧杯壁上的液体都已经结晶了。
有人碰到这样的问题么,很着急,急求帮助。
1.裂解液和上样液配方有无问题?
2.尿素怎么老不容,有没有什么方法加速其溶解?
顶部
王小主[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107991
精华 0
积分 165
帖子 70
信誉分 100
可用分 1096
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
2
 

对了,恒温磁力搅拌器的温度调的是20度。尿素应该在低温时容易结晶析出吧?调到30度会好些吗?
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
3
 

你配多少裂解液啊?用烧杯配的吗?如果是的话的确有点难溶解,我们一般都是用离心管配的,比如配1ml,那么把所有药品及buffer称好加好后再加水(大约加0.55ml水),然后把管子盖紧,任意混合摇匀即可,一般过5分钟左右就可以了,如果你配5ml的话,可以用5ml的离心管或者其它管子,
顶部
王小主[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107991
精华 0
积分 165
帖子 70
信誉分 100
可用分 1096
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
4
 

我一般配置10ml或20ml,都是在烧杯里溶解,放在恒温磁力搅拌器上搅拌,为什么在管子里会快些呢?溶解性不都是一样的么?
顶部
王小主[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107991
精华 0
积分 165
帖子 70
信誉分 100
可用分 1096
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
5
 

顺便再问个问题,我的bradford工作液:
95%乙醇 25ml
85%磷酸 50ml
考马斯亮蓝G250 0.05g
二次水 至500ml
发现怎么的都会有一些考马斯亮蓝G250的小颗粒不能溶解,最后用0.45um滤膜过滤了,这样可以么?会影响测定时的吸光值么?
顶部
66小飞侠[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75376
精华 0
积分 466
帖子 651
信誉分 100
可用分 4008
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
6
 
顺便再问个问题,我的bradford工作液:
95%乙醇 25ml
85%磷酸 50ml
考马斯亮蓝G250 0.05g
二次水 至500ml
发现怎么的都会有一些考马斯亮蓝G250的小颗粒不能溶解,最后用0.45um滤膜过滤了,这样可以么?会影响测定时的吸光值么?

==============

正常的,不必在意
顶部
王小主[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107991
精华 0
积分 165
帖子 70
信誉分 100
可用分 1096
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
7
 
正常的,不必在意

=====================================

也就是我用0.45um过滤了可以照常使用,是吧?
顶部
98776langtao[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74068
精华 0
积分 275
帖子 290
信誉分 100
可用分 2191
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
8
 

过滤就可以了,有的时候尿素质量不好,我也遇到过,同样的浓度,同一家买的尿素,第一瓶就很好溶解,可是我用第二瓶的时候就特别不好溶解,浑浊的也不是沉淀,就是乳白色,然后我过滤后用的,第三瓶同样的浓度就又没事了,澄清的,不知道你是不是遇到不好的尿素什么的了
顶部
kuohao17[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77299
精华 0
积分 559
帖子 716
信誉分 101
可用分 4453
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
9
 

我也是配的10ml的,用的是40ml的离心管,好像是4.8g尿素吧?反正把所有药品都称好,大概加5-6ml水溶解,只要在振荡器上震荡一会就好了,溶了之后差不多就10ml左右再定容。我用的尿素级别也不高的,就是生工的。
顶部
xiaoxiaoniao[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 108878
精华 0
积分 509
帖子 677
信誉分 100
可用分 4049
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
10
 

你用的尿素应该出现了质量问题,建议换新购尿素
顶部