小中大银染图很漂亮,考染图差距太大,这只是染色方法不一样吗?
考染图,酸性端横纹很多,IEF聚焦不好,或者根本没有聚焦,仔细想下自己的操作有什么该注意而没有注意到的细节.
比如,IPG胶条是否完全浸润到样品上. 样品在上样前有没有离心一下,去除不可溶性杂质. 还有就是样品中的盐离子浓度高也影响聚焦. 例外检查下酸性端的胶条是不是有问题啊.我也碰到过类似问题,换了一批胶条就没问题了.
总之,影响结果的因素较多,楼主要逐一排除,找出问题根源.
PS: 实验操作细节一点要多加留心额~
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我也怀疑过是不是考染IEF根本么有进行啊,是不是我在做梦,每次看到悲催的考染图我都想死,为什么银染和考染都是一样的操作,一个批次的胶条,银染就好好的,考染就不行呢,上样前都离心过的,如果是盐离子的影响的话,为什么只有酸性端是这样啊,不知道是不是核酸或者是脂类物质影响,我用过tca丙酮法,蛋白很难重溶,超声也溶不了多少,而且跑出来的也是酸性端都是横条纹,还不如沉淀之前的