小中大【求助】关于小分子量的western
请问，我最近做了些western，
小分子量的比如说21kd、20kd和16kd的P21、bax、survivin没有作出来，大一点的没有问题。很迷惑。
我的条件是：上样总蛋白75ug，配10％的胶，电泳时最小为10kd的marker还留着，PVDF转膜湿转300mA 1h或350mA 1.5h都试过，封闭后一抗过夜。TBST洗膜，二抗1.5h，TBST洗膜。而后ECL显影。
内参37KD的GAPDH没有问题。条带很浓。但是小分子的P21，bax，survivin都没有出来。
我仔细搜索了版内大家的讨论：
对于转膜时间和电流大小 没有一致的看法：有人认为半个小时，200mA就够了。也有人转2h。有人用恒压转。那么，到底是恒流好还是恒压好？
我一直都用恒流350mA转膜1.5h的，转30kd以上都没有问题。因为现在要做的是小分子，所以调成300mA 1h试过,虽然GAPDH可以出来，但目的蛋白没有。想问转膜条件到底应该如何？PVDF膜理论上应该不会使得蛋白转过头吧？
我需要做怎样的调整。
我今天做，自己初步的调整如下：
1、胶配成12％
2、加大上样蛋白量100ug
3、转膜时间是否也需要再减少？
