蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】大肠破菌后的样品 或者酵母表达上清 如何澄清？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 14  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】大肠破菌后的样品 或者酵母表达上清 如何澄清？

大海啊故乡[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108867
精华 0
积分 193
帖子 125
信誉分 100
可用分 1275
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
1

发表于 2013-6-5 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】大肠破菌后的样品 或者酵母表达上清 如何澄清？

请教高手： 在中试蛋白表达纯化中，我们会经常用大肠杆菌或者酵母表达蛋白，表达蛋白在大肠杆菌破菌后的液体中，或者在酵母分泌表达的上清中，请教高手，如何对发酵后的样品进行澄清， 我目前用离心方法，但是离心后，貌似过滤下再上柱子比较好，但是死端过滤基本上不行哦，请问大家是如何处理澄清这步？一定要使用中空纤维柱么？
顶部
大海啊故乡[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108867
精华 0
积分 193
帖子 125
信誉分 100
可用分 1275
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
2

发表于 2013-6-5 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】大肠破菌后的样品 或者酵母表达上清...


请教高手： 在中试蛋白表达纯化中，我们会经常用大肠杆菌或者酵母表达蛋白，表达蛋白在大肠杆菌破菌后的液体中，或者在酵母分泌表达的上清中，请教高手，如何对发酵后的样品进行澄清， 我目前用离心方法，但是离心后，貌似过滤下再上柱子比较好，但是死端过滤基本上不行哦，请问大家是如何处理澄清这步？一定要使用中空纤维柱么？
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
3

发表于 2013-6-5 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大肠杆菌的，我之前用中空纤维膜过滤的，但是中空纤维膜堵得很严重，要不断的洗着，而且，中空纤维膜吸附很严重，但是这处理大肠杆菌的菌体溶液，中空纤维膜用着总的感觉还是不错的。
酵母发酵上清液就不好了，我前几天试过的，本来酵母发酵出来的目标蛋白浓度就非常低，我用中空纤维膜就是想澄清了再浓缩一下，脱一下色的，但是中空纤维膜浓缩之后，目标蛋白总量损失很大
顶部
zzzz[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74598
精华 1
积分 656
帖子 967
信誉分 102
可用分 5638
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
4

发表于 2013-6-5 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看文献或书上的一些介绍，应该是用等电点加硫酸铵沉淀的方法沉淀培养基中的蛋白，再进一步重悬后进行下一步的纯化。
顶部
大海啊故乡[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108867
精华 0
积分 193
帖子 125
信誉分 100
可用分 1275
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
5

发表于 2013-6-5 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

硫酸铵沉淀不失为一个好方法，高速离心也是一个非常不错的选择
顶部
大海啊故乡[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108867
精华 0
积分 193
帖子 125
信誉分 100
可用分 1275
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
6

发表于 2013-6-5 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

目前我正在准备用多层过滤器进行澄清，还不知道效果怎么样，我用的是赛多利斯的产品
顶部
33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
7

发表于 2013-6-5 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教高手： 在中试蛋白表达纯化中，我们会经常用大肠杆菌或者酵母表达蛋白，表达蛋白在大肠杆菌破菌后的液体中，或者在酵母分泌表达的上清中，请教高手，如何对发酵后的样品进行澄清， 我目前用离心方法，但是离心后，貌似过滤下再上柱子比较好，但是死端过滤基本上不行哦，请问大家是如何处理澄清这步？一定要使用中空纤维柱么？

楼主你好！

大肠杆菌和酵母的澄清我都做过，综合来说，中空纤维澄清是最方便和经济的方法了。不过不能用国产的中空纤维，很容易堵；另外，应用中空纤维时有很多小的技巧，也就是有一些参数需要优化，才能保证中空纤维用的比较好。如果需要，可以在交流。
顶部
9900[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75149
精华 0
积分 399
帖子 478
信誉分 100
可用分 3216
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
8

发表于 2013-6-5 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
中空纤维一套设备你们选用的是什么品牌的？大概多少钱：还有相关的一些参数是什么？样品浊度应该是这些参数设定的一个参照，您有相关的操作程序么？能不能给我点资料 谢谢！
顶部
wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态 离线
9

发表于 2013-6-5 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

需要优化的条件比如切向流速，透过压，如果样品太粘稠还需要做透过端控制等。一般实验室都会先用Quixstand system做条件优化的。
顶部
lixi559[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73492
精华 0
积分 560
帖子 820
信誉分 100
可用分 4896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-23
状态 离线
10

发表于 2013-6-5 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主 你好 我公司之前做过糖化酶的发酵液膜系统，不会产生上述的堵塞问题 而且膜在酶制剂上面也基本上不用中空纤维膜 容易堵塞 一般用的管膜 陶瓷膜 或者抗污染卷式膜。有兴趣的话可以交流一下。
顶部
 14  1/2 12››