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动脉粥样硬化
刚才搞错了
组织中脂蛋白测定
从组织中提取载脂蛋白和脂蛋白可采用冰组织培养液或磷酸缓冲液盐水灌注整体动物, 可避免组织被血浆蛋白质或血浆脂蛋白污染。将一根导管插入已麻醉的动物心脏左心室, 切断下腔静脉, 用培养液充分灌注动物(小鼠至少用250ml)至流出液中已无血液。当血液被清除后, 肝脏变化较亮的颜色。灌注后组织提取方法依所需要的是完整脂蛋白或是载脂蛋白而定。
一、完整脂蛋白提取
必须十分小心, 以确保脂蛋白不变性或结构不改变。脂蛋白是从组织中过滤入冰冻的提取缓冲液中, 缓冲液(2.05%Tris-HCl、0.88%NaCl、0.05%EDTA, pH7.4)含有蛋白酶抑制剂而不含去垢剂。该方法可用来从正常的和再生的神经组织是或从动脉粥样硬化斑块中提取完整的脂蛋白。先将组织切成小碎片, 然后用含蛋白酶抑制剂的缓冲液(10-20ml/每克组织)进行孵育, 缓冲液中加有防腐剂(每100ml中含0.13克E-氨基已酸、2mg 氯霉素、0.2mg leupeptin、0.01ml aproteinin、2.4mg胰肽酶A、50000单位青霉素G和5mg硫酸链霉素)。获得最多提取物的时间是由经验决定的。用固体KBr使溶液密度提高至1.21g/ml, 以使脂蛋白浓缩, 然后超速离心使脂蛋白分离。
二、载脂蛋白的提取
在有去垢剂存在下, 使组织成为匀浆, 以获取细胞内和细胞间的载脂蛋白。如果提取物直接用凝胶进行分离和Western印迹分析, 则可用SDS-PAGE样本工作缓冲液进行灌注后, 并使动物组织匀浆, 然后低速离心, 分析上层清液中的载脂蛋白。但是, 在分析前常常使用免疫沉淀的方法, 使待测蛋白质沉淀。这时, 可用含去垢剂的缓冲液(50mM Tris-HCl, pH8.5, 120mM NaCl和0.5%Noneidet-P40)进行组织匀浆(10ml/每克组织), 离心100000g, 用免疫沉淀法使上层清液中的载脂蛋白沉淀。 从组织中提取的脂蛋白和载脂蛋白需要进一步进行分离和分析, 可采用超速离心、层析、电泳等方法, 这与分离和分析血浆中的脂蛋白和载脂蛋白基本相同, 可参考本书前面的有关介绍。转发：cuturl('http://www.chinalipid.com/measure/45.htm')
