小中大【讨论帖】我总结的细胞中提取核蛋白步骤
从25cm2细胞瓶中提取步骤：
1、PBS洗2次。
2、胰酶消化细胞，加4度培养液5ml中止反应。
3、3000rpm 离心5min（4度），去上清。
4、加入裂解液1.5ml，剧烈涡旋。
5、冰加异丙醇，搅拌成糊状，离心管放入冻结，然后37度融化，反复3次。
6、100度煮沸5min。
7、15000rpm离心10min。
8、吸上清于新管，进行电泳。或者－80度冻存。
裂解液：60mM Tris-HCL(PH7.2)
2% SDS
PMSF和巯基乙醇有毒，所以没有用，影响应该不大。保持低温操作，可以不用加蛋白酶降解抑制剂。我看到有人加了10％甘油，不知道起什么作用。
