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标题:【分享帖】上传我的廉价EMSA protocol。

bohe221[使用道具]
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发表于 2013-6-8 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【分享帖】上传我的廉价EMSA protocol。

应部分战友要求，上传我的廉价EMSA protocol。
大家看看是否合用，我做的效果还不错。


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bohe221[使用道具]
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发表于 2013-6-8 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
第二部分。
六孔板长细胞时要尽量让细胞长满，当然用10cm的皿也行，用量酌情增减。


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发表于 2013-6-8 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这里是我做的一个EMSA的结果，虽然super shift的带看不到，但是抗体已经对probe和蛋白的结合发生影响，也是可以的。
lane1 free probe, lane 2 wild type probe, lane 3 mutant probe, lane 4 100X cold wild type competitor, lane 5 100X cold mut competitor, lane 6 IgG control, lane 7 anti-target protein antibody


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bohe221[使用道具]
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发表于 2013-6-8 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个是做的一个剂量依赖性的EMSA，用不同浓度试剂处理的细胞，看对目的蛋白结合DNA活性的影响。


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发表于 2013-6-8 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
强~
可惜还是要用同位素
昨天听说湘雅那边有一种载体,可以利用它做EMSA而不用同位素,不过不知道是谁.
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发表于 2013-6-8 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也想过用内源的，但是因为不想做同位素标记，所以怕内源蛋白量少，信号弱，看样子也只有试试了，反正我现在的原则就是能不做同位素坚决不做^_^，谢谢你的protocl啦，就照他做了~只是不知道还有米时间完成...
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发表于 2013-6-8 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

晕，都是实验室的兄弟们在捧场啊。大家好好努力，做emsa很容易的，而且内源蛋白的量是足够的。emsa用同位素的话，是相当灵敏的。有时候只用0。5ug的核蛋白都能做出比较清晰的带型。
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发表于 2013-6-8 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不错啊，有没有不用同位素的啊
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-6-8 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问你的凝胶是多大的，什么规格？？？
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