蛋白质与蛋白组学

请问Sepharose CL-6B 怎么装柱啊，我买了Sepharose CL-6B 想要装柱分离东西，但是这个是个液体，那怎么装柱呢啊？

可以看说明书或咨询厂家，不知道以下是否对你有帮助：
介质准备：

CM Sepharose CL-6B保存于20%乙醇当中，倾掉20%的乙醇溶液，加入到结合buffer中，制备粗提物。结合buffer中不能含有明显增加粘性的试剂。

在装柱步骤结束后，柱子用结合buffer平衡。

装柱：

1．在色谱进行的温度下平衡所有材料。

２．用buffer除去柱子颗粒空间内的空气，确定柱子网状结构中没有空气。

3.关闭柱子开关，并留几厘米的buffer在柱子中。

4．将粗提物连续倒入柱子中，用玻璃棒抵住柱子壁，以减少空气气泡进入

5．立即加入buffer,填满柱子剩余空间，封闭柱子上方，连上橡胶管

6．打开底部开关（柱子底部）连上管子；控制在所需流速，参考表1。主要用于装柱过程。（注：如果你装柱时采用了最大流速，在接下来实验过程中不应超过此速度的75%）。

7．在达到柱床高度后，保持装柱流速，约3个柱体积。

受体使用：

1.介质装好后，关闭柱子开关，移去上部盖子，小心加入buffer到剩余的柱子内，以在顶部形成一个向上的弯液面。

2．以一递度度将受体插入柱子中，保证无空气进入网状结构

3．在柱子和管子之间为一无气泡的液体连接系统，柱子和样品的连接系统。

4．缓慢移动（滑动）柱子插入物，以使网状结构上方的空气和capilliary facsings’?用洗脱液取代。这个过程要保证各个方向的空气均被赶走。

5．在介质表面锁住受体，打开柱子开关，开始洗脱，保持装柱流速，加入洗脱液直至柱子介质稳定，若需要再加入受体。

平衡：

在开始之前应确保离子交换柱达到平衡，可以从柱子流出的结合buffer的导电北或pH达到不高数值并和加入的溶液相同来确定。

柱子平衡后可用来准备使用。

结合：大部分过程中是让目的分子结合到离子交换剂上而让其它分子流过然而，一些情况相反，让目的分子流过。

吸附过程中，选择一个合适的pH值的buffer很关键，请参考表2buffer的离子强度应保持很低这样可以不干扰样品质结合。建议操作的pH值在buffer 的pka 0.5个pH单位以内，并且至少低于目的分子的pI值一个pH值。

洗脱：解离应用逐渐增高的盐溶液或遂渐增高的pH（线性或遂级）梯度。

再生：根据样品的性质，再生一般用高离子强度的buffer(1-2M Nacl)或增高的pH值洗耳恭听随后用结合buffer再平衡。

在一些应用中，像变性的蛋白或脂类等一些物质不会在再生过程中洗掉。可以用CIP过程除去。

CIP：用0.25倍床体积的2M Nacl 洗柱子，相反的流向，10-15min，除去离子结合pr用1M NaoH,大约40cm/h 1~2小时，相向流向，除去预期pr和脂pr用4倍柱体积，70%乙醇或30%异丙醇反流向，除去结合力强的流水pr，脂蛋白等。使用高浓度有机溶剂进用渐增的梯度时应避免气泡的形成。同样的，洗柱子可以用2倍体积的碱性或酸性清洁剂溶液。比如可以用0.1~0.5%非离子清洁剂加入0.1M氨基酸中，在 40cm/h线性流速下洗1~2小时反流向）然后用70%乙醇；5倍体积除掉残余的清洁剂。在所有发问下均须用至少3倍体积的binding buffer洗。

卫生处理：将微生物污染降至最少值。用0.~1M NaoH洗40cm/h 30~60min反流向。重新用灭菌的binding buffer平衡。

保存：介质4~8℃ 20%乙醇中，长期保存，在合适的抑细菌剂中：如20%乙醇，介质不能结冻。

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楼上回答不错啊，学习下。

不错，谢谢！ 后来我在网上也找到了这个使用说明

这个更详细，谢谢了，