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标题:【求助】GST蛋白表达

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【求助】GST蛋白表达


有几个问题需要各位帮忙一下:
1. 看到有资料说诱导以后直接收菌,然后直接用SDS 裂解缓冲液100度加热变性,然后离心上样。我想问的是这个离心上清样只是包含可溶的蛋白吧?没有包含体吧?
2.在GST表达时候,是不是都用PBS啊?是不是都用PH=8.0的?谢了
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summerxx[使用道具]
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no matter in which form it expresses,it is feasible to add sds buffer directly to lysis the bacteria and then to see whether it expresses or not.
i have used pbs(8.0)as lysis liquid
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1,同意楼上的,SDS裂解液中含的SDS能够打破蛋白间的二硫健,使蛋白溶解,所以离心上清只是看蛋白有没有表达,和包涵体没关系,要看是可溶性表达还是包涵体表达需要超声破碎后离心,分别取上清和沉淀,加裂解液后进行SDS-PAGE。
2,不只是GST,一般的蛋白都可以表达后用PBS重悬,好像是通用的吧。
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同意楼上的,我就是细胞直接裂解上样,有目的蛋白,超声裂解后上清没有,都在沉淀里,是包涵体,讨厌的包涵体。啊。。。
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请问知道GSTtag 在建ELISA时干扰高吗?
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包涵体表达量高,如果免疫原性可以还是有优势 的
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birdfish[使用道具]
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请问知道GSTtag 在建ELISA时干扰高吗

不明白什么意思,说明白点
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但是看到很多版本,PBS的PH不一样?那究竟用什么PH的PBS呢?
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eric930[使用道具]
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有几个问题需要各位帮忙一下:
1. 看到有资料说诱导以后直接收菌,然后直接用SDS 裂解缓冲液100度加热变性,然后离心上样。我想问的是这个离心上清样只是包含可溶的蛋白吧?没有包含体吧?
2.在GST表达时候,是不是都用PBS啊?是不是都用PH=8.0的?谢了

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1、不是的,加热变性的过程中,sds可以是包涵体溶解到上清中,所有的蛋白都会在上清中,所以,这样只能是看蛋白是否表达,不能看蛋白的形式,因为即便是包涵体也将在上清中。离心主要是为了将DNA离心下来方便上样。
2、你的意思是提纯吗?这个可参考gst系统的mannul。
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kswl870[使用道具]
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不一定要用PBS,我们一直在用Tris Buffer效果也挺好的,缓冲系统嘛,PH最好根据你的蛋白的PI来定,不是固定的,一般在6-8之间,远离PI就好
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