小中大有几个问题需要各位帮忙一下:
1. 看到有资料说诱导以后直接收菌,然后直接用SDS 裂解缓冲液100度加热变性,然后离心上样。我想问的是这个离心上清样只是包含可溶的蛋白吧?没有包含体吧?
2.在GST表达时候,是不是都用PBS啊?是不是都用PH=8.0的?谢了
===========================================================================================================
1、不是的,加热变性的过程中,sds可以是包涵体溶解到上清中,所有的蛋白都会在上清中,所以,这样只能是看蛋白是否表达,不能看蛋白的形式,因为即便是包涵体也将在上清中。离心主要是为了将DNA离心下来方便上样。
2、你的意思是提纯吗?这个可参考gst系统的mannul。