蛋白质与蛋白组学

1.不太清楚嗯，我做的也会处出现这种状况，我是从以下几方面分析的：
a.抗体问题
b.上样量太少了
3.内参表达太少了

2. 应先调成一致的浓度。

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我已经换过一个公司内参的抗体了，可是还是那样；上样量到100ug按理说应该不少了吧？我看过别人的文章，好像没人说肾组织bate-actin表达少，也有人用它当内参。。。你做的后来内参的表达多了么？

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阿尔茨海默病

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是不是actin转膜转过了？这种情况是不应该，不过，我也遇到过，后来是发现BIORAD的湿转槽与MILLIPORE的膜都有问题，于是跑到别的实验室做的。

你说的上样两种方案都行我都试过，等深度等体积上样的好处是跑胶时指示剂显示的带为一条直线，很平，好看。不等体积是指示剂显示为小小的波浪形，不过对结果没什么影响。

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我目的蛋白和内参的分子量差不多，分两板胶跑的，会一个跑过另一个没事么？我也用的BIORAD的仪器，前边有师姐曾经做出来过，但是到了我这就不行了，内参总是出不来，我染膜倒是有条带，但是看上去特别细。

我已经换过一个公司内参的抗体了，可是还是那样；上样量到100ug按理说应该不少了吧？我看过别人的文章，好像没人说肾组织bate-actin表达少，也有人用它当内参。。。你做的后来内参的表达多了么？

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我的上样量到过90ug，可是还是没出来，后来老板说，是抗体的问题，叫我不要浪费标本了，再后来我换了内参，换成贝塔-actin了，结果做出来了（除了两条有技术问题外，其余条带都很漂亮），我想说虽然不知道是哪里出问题了，但至少可以说明我不是我的技术问题所致，过些天再重订一支GAPDH，再试试看看。

我已经换过一个公司内参的抗体了，可是还是那样；上样量到100ug按理说应该不少了吧？我看过别人的文章，好像没人说肾组织bate-actin表达少，也有人用它当内参。。。你做的后来内参的表达多了么？

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我觉得还有一个办法，就是做做其他标本，看看你的内参能不能出来，如果能，肯定不是抗体的问题，个人觉得也不是你的技术问题，转膜也没过度，而且染色有蛋白，就是淡，那就应该是表达的问题吧！表达太少了，用这个技术检测不敏感。。。

我觉得还有一个办法，就是做做其他标本，看看你的内参能不能出来，如果能，肯定不是抗体的问题，个人觉得也不是你的技术问题，转膜也没过度，而且染色有蛋白，就是淡，那就应该是表达的问题吧！表达太少了，用这个技术检测不敏感。。。
小妹一点愚见！

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呵呵，谢谢啊，我个人觉得应该也不是我的技术问题。我们这用odyssey,灵敏度应该是比较高的。。。我今天又做了个其它的指标，也能出，可是内参还是不行。。。你们实验室一般孵育一抗和二抗的时候才用什么方法？