蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】纯化his-tag蛋白的镍柱可以永久性再生吗

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 23  1/3 123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】纯化his-tag蛋白的镍柱可以永久性再生吗

小游abc[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108891
精华 0
积分 256
帖子 231
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
1

发表于 2013-6-8 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】纯化his-tag蛋白的镍柱可以永久性再生吗


纯化his-tag蛋白的镍柱可以永久性再生吗？如果不能够，大概能够用多少次呢？

几丁质层析柱大家都是用5次就重新换填料吗？
顶部
tie8[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75844
精华 0
积分 442
帖子 543
信誉分 100
可用分 3571
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
2

发表于 2013-6-8 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

任何纯化填料都不可能永久再生。使用次数与柱的种类、你的样品原料性质、再生方法、操作细节习惯以及纯化的要求相关，没有确定的说法。但可以肯定的是，IDA类型的镍柱（如Chelating Sepharose FF）是比较耐用的，注意再生操作的话用个100-200次没有问题。NTA类型的镍柱在使用还原剂的条件下，镍脱落较多，再生后不能达到初始效果，使用次数要少很多很多。
顶部
49888[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
3

发表于 2013-6-8 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现在的Ni-NTA柱子都很便宜，不用太在意的。
顶部
9900[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75149
精华 0
积分 399
帖子 478
信誉分 100
可用分 3216
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
4

发表于 2013-6-8 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

NTA螯合四价，IDA螯合三价，NTA的稳定性要更好一些吧。
顶部
04906[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73544
精华 0
积分 599
帖子 858
信誉分 100
可用分 5155
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
5

发表于 2013-6-8 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在的Ni-NTA柱子都很便宜，不用太在意的。

===============================================

是的，现在的柱子都不贵。要拿到好的结果，完全不用太在意。
顶部
04906[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73544
精华 0
积分 599
帖子 858
信誉分 100
可用分 5155
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
6

发表于 2013-6-8 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
NTA螯合四价，IDA螯合三价，NTA的稳定性要更好一些吧。

===========================================================================================================

IDA不能用还原剂，NTA可以用还原剂，我说的是在用还原剂条件下的NTA和不用还原剂的IDA比较。IDA可以很方便的脱镍再生，NTA不可以。NTA脱镍后再挂镍就不耐还原剂了，NTA生产商是怎么做到挂镍后耐还原剂的，没人说。我们的版助是做填料的大师，如果不是涉及到商业秘密他早就告诉大家了。
顶部
小游abc[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108891
精华 0
积分 256
帖子 231
信誉分 100
可用分 1911
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
7

发表于 2013-6-8 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

填料很贵啊。几丁质珠填料(279元/10ml)只能够提5次蛋白；而25ml NI-NTA都在2600元以上。
顶部
remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
8

发表于 2013-6-8 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

NTA的可以照分子克隆上的去再生，效果挺好，当然肯定不会是永久性的， 不过这样可以用不少次，当然得到好的实验结果更重要，改换新的就换新的。
顶部
summerxx[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75852
精华 0
积分 885
帖子 1388
信誉分 101
可用分 7783
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
9

发表于 2013-6-8 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
填料很贵啊。几丁质珠填料(279元/10ml)只能够提5次蛋白；而25ml NI-NTA都在2600元以上。

======================================================================

Ni-NTA的柱子GE的预装柱HisTrap FF 1 mlX5也就$130，我一年多用了两个，效果还非常好的。

Chitin的填料没用过。
顶部
131415[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74126
精华 0
积分 565
帖子 789
信誉分 100
可用分 4798
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态 离线
10

发表于 2013-6-8 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
IDA不能用还原剂，NTA可以用还原剂，我说的是在用还原剂条件下的NTA和不用还原剂的IDA比较。IDA可以很方便的脱镍再生，NTA不可以。NTA脱镍后再挂镍就不耐还原剂了，NTA生产商是怎么做到挂镍后耐还原剂的，没人说。我们的版助是做填料的大师，如果不是涉及到商业秘密他早就告诉大家了。

==============================================

请问如果两者都是在不用还原剂的条件下哪个更稳定呢？谢谢
顶部
 23  1/3 123››