液质联用

我做的是生物制品中的氨苄西林残留，内标选的阿莫西林。
仪器：美国AB3200，液相是岛津LC-20AD。
流动相条件：乙腈，甲酸水（甲酸调PH3.1)
梯度程序：0.01min 乙腈5%
2min 乙腈5%
6min 乙腈80%
7min 乙腈5%
8min 乙腈5%
由于基质里面含有不挥发性盐，所以用了切换阀，前三分钟打进废液，后面再进质谱。
这个条件一直做的很好，内标在4min出峰，氨苄西林在5.4min出峰。现在的问题是：条件不能重复了，内标峰形很怪(峰分叉，很毛糙），而且出峰时间延迟了0.5min.而氨苄西林没有变化。如果轻微变一下梯度条件，内标峰就变的很好了，所以我认为质谱是没有问题的。现在的问题就出在液相条件上，我找了很多原因，最开始换了色谱柱，换了两根（同品牌，同规格），一根还是新的，但内标出峰还是一样怪！现在就排除了柱子的问题，那么问题是不是就出在流动相条件上？！乙腈用的牌子是默克的，应该没问题吧。水是制的超纯水，以前也一直这样用的，调PH前是校正了PH仪的，PH值应该还是没问题。但问题还是没有解决！是否是梯度程序问题呢？（但以前一直都是用的这个梯度，重复性很好啊）
请教高手，帮忙找下原因啊！这个问题困扰我好久了，方法学已经做完了，现在要测样品了，确出现了这种问题，小妹真的很急啊！

标准品也是这样吗？

如果样品基质盐不是很多，先不接阀试试

标准品也是一样的，我也试过不接十通阀，直接进质谱，出峰还是一样的！
找了一个星期的原因了，还是不解！请求高手帮忙！

各位高手，麻烦帮忙分析下哈！是我的问题没叙述清楚吗？我看浏览次数也蛮多，确没有多少人回复。请教各位高手了！谢谢

小妹妹深夜还如此敬业，可敬可佩啊。。。。咨询一下仪器厂家工程师。相信会有较好的回答。

你所说的改变梯度条件是指什么？？
有没有可能是平衡时间不够啊？？

“这个条件一直做的很好，内标在4min出峰，氨苄西林在5.4min出峰。现在的问题是：条件不能重复了，内标峰形很怪(峰分叉，很毛糙），而且出峰时间延迟了0.5min.而氨苄西林没有变化。如果轻微变一下梯度条件，内标峰就变的很好了，所以我认为质谱是没有问题的。”

“内标峰形很怪(峰分叉，很毛糙），而且出峰时间延迟了0.5min”，峰分叉很毛糙 是UV图还是MS的TIC图，还是两者都这样？UV 与 TIC上，该内标的保留时间差别大吗？怀疑是过UV检测器后进质谱之前这段管路有点堵，或者是ESI的喷针有些堵。检查一下看是不是这个原因。

我已经质询过AB和岛津的应用工程师了，他们提了很多种原因，我一一试过了，但还是没解决，郁闷中！

我认为你的梯度陡度是不是太高了！！4min变化75%！！然后1min变回来！！

你如果怀疑梯度出了问题可以做下试验啊！验证下！你这个问题好像很棘手！20AD是不是高压混合？会不会是在混合的时候产生了气泡呢。。。
另外就是考虑下你使用柱子的耐酸性如何？是不是适合你的这个方法！虽然换过新柱子，但是我认为还不能排除柱子的问题！
继续关注！！

“你所说的改变梯度条件是指什么？？
有没有可能是平衡时间不够啊？？”
谢谢大虾的回答！
改变梯度条件指把梯度时间程序变一下，只是轻微变一点。
以前的梯度条件0.01min、2min、6min、7min、8min
           B相%（甲酸水）      95               95         20         95        95
改变后       0.01min、1min、5min、6min、7min
           B相%      95               95         20         95        95
两针间平衡时间3min,进样是压力是稳定到和前一针进样时一样，所以觉得平衡时间应该够了的。