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标题:【求助】脑组织裂解问题

birdfish[使用道具]
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发表于 2013-6-19 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】脑组织裂解问题


我近期拿了别人的裂解液进行脑组织匀浆，当时离心完（20分钟，12000转，4°）后，吸取上清液分装，当时的上清液还是可以的，清的。但是，昨天从冰箱中拿出蛋白分装时，发现蛋白复温时，蛋白很浓，粘稠，用移液枪时根本吸不动蛋白（太黏了）。问了师兄可能是裂解液的问题，也有人说是蛋白太浓了。请问一下有人遇到这种情况吗？为什么？蛋白可以用吗？
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2013-6-19 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 birdfish 于 2013-6-19 11:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我近期拿了别人的裂解液进行脑组织匀浆，当时离心完（20分钟，12000转，4°）后，吸取上清液分装，当时的上清液还是可以的，清的。但是，昨天从冰箱中拿出蛋白分装时，发现蛋白复温时，蛋白很浓，粘稠，用移液枪时根本吸不动蛋白（太黏了）。问了 ...

是从-20度冰箱拿出来吗？
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u76mp[使用道具]
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发表于 2013-6-19 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是解冻的温度变化太大， 可以试试先从-20拿到4度放一段时间，再从4度拿出来。
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birdfish[使用道具]
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发表于 2013-6-19 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室的组织蛋白都是保存在-70°的冰箱里的，分装时直接拿出冰浴复温的
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2013-6-19 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
裂解液使用的时候，针对不同的组织最好是根据裂解液各成分的作用做一下适当的调整，这样才能获得获得自己想要的 蛋白，像你这种情况估计是裂解获取的高含量蛋白太多了，这样即便吸出也会影响后续实验的，有很多低丰度蛋白在图谱上是无法显示的。
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发表于 2013-6-19 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

和裂解的成分有关系，你提取的蛋白浓度应该挺高的，匀浆后再超声就好了的，再进行后续的处理，
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发表于 2013-6-19 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

离心完后沉淀的状态是怎样的？可能是上面几位仁兄提到的蛋白含量太高，适当增加裂解液的量试试。
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发表于 2013-6-19 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超声一下就好了
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birdfish[使用道具]
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发表于 2013-6-19 11:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我提取出来的蛋白浓度大约在30mg/ml，不过吸上清的时候下面的沉淀，能吸上来。
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any333[使用道具]
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发表于 2013-6-19 11:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

会不会是核酸的问题，核酸比较粘稠，超声打断一下看看效果
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