【求助】Western blot压片后经常在某一特定区域有一空白区域

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标题:【求助】Western blot压片后经常在某一特定区域有一空白区域

any333[使用道具]
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发表于 2013-6-19 12:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近做Western blot，用的是化学发光法，压片后经常在某一特定区域有一空白区域（具体请看图片），请帮忙分析一下原因吧，非常感谢！

附件

2013-6-19 12:47

44910351.snap.jpg (22.9 KB)

kswl870[使用道具]
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发表于 2013-6-19 12:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

ecl显影液涂抹均匀了吗？你放暗盒的桌面平整吗？

any333[使用道具]
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发表于 2013-6-19 12:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 kswl870 于 2013-6-19 12:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

ecl显影液涂抹均匀了吗？你放暗盒的桌面平整吗？

显影液涂均匀了，之前做别的蛋白都是在哪一个地方做的，桌面应该没问题的

jkobn[使用道具]
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发表于 2013-6-19 12:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有时也碰到这种问题，同关注

难道是一抗孵育时液面没有完全没过膜？

BOSS2011[使用道具]
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发表于 2013-6-19 12:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

什么显影液，怎么孵育的抗体，可能是ECL的问题，你是把膜放在哪里显影，是PE手套还是玻璃纸，

any333[使用道具]
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发表于 2013-6-19 12:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 BOSS2011 于 2013-6-19 12:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
什么显影液，怎么孵育的抗体，可能是ECL的问题，你是把膜放在哪里显影，是PE手套还是玻璃纸，

santa cruz的显影液和抗体，一抗置于平皿中，摇动孵育2小时，二抗1小时，显影时膜放在PE手套中，也试过保鲜膜。
请指教！谢谢！

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发表于 2013-6-19 12:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

会不会是膜干燥了。我今天做的时候因为怕ECL液污染，所以稍微晾干了一下，结果就出现这样了。因为膜风干后，表面结合的二抗也会脱落。这样的话可能就出现这种情况了。

BOSS2011[使用道具]
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发表于 2013-6-19 12:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个ECL的问题可能性大些，和ECL的特异性,灵敏度以及稳定性有关系，还有原因就是你的一抗或者二抗浓度高了，有些ECL 是超敏的，如果是超敏的ECL就不好手动曝光，可以选择机器曝光，建议排除了抗体孵育不均匀的原因再找ECL的问题，同时换ECL以及调整抗体浓度，二抗我一般用1:10000以上，

xyw5[使用道具]
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发表于 2013-6-19 12:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

更感兴趣的是LZ这样的图可以用于结果处理分析吗

我的条带和LZ类似不知道怎么处理

any333[使用道具]
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发表于 2013-6-19 12:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 xyw5 于 2013-6-19 12:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

更感兴趣的是LZ这样的图可以用于结果处理分析吗

我的条带和LZ类似不知道怎么处理

当然不能，我只是为了让大家更容易明白我说的问题，特意做了一张曝光时间特别长的片子，曝光时间短的片子特异性条带还是挺明显的，就是右边缺一块，郁闷之极！

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