蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】蛋白印迹分析 内参蛋白 beta-actin

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】蛋白印迹分析 内参蛋白 beta-actin

逗号是句号[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107985
精华 0
积分 173
帖子 106
信誉分 100
可用分 1246
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
1

发表于 2013-6-19 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白印迹分析 内参蛋白 beta-actin

请教WB的各位同仁，前辈，
刚开始学做western， 内参蛋白用的是beta-actin，可是检测出来的条带一直都是在50-75kda之间，beta-actin的分子量一般在41，2kda左右，有人知道原因么？
研究室其他人也用同样的抗体没有问题，不知道自己哪步出问题了
样品用的是骨骼肌，另外为了确认beta-actin， 在检测目的蛋白前先测了beta-actin， 结果一样
实在找不出原因了，有知道原因的麻烦分享一下，感激不尽
顶部
junhun[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77185
精华 0
积分 561
帖子 781
信誉分 100
可用分 4746
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-14
状态 离线
2

发表于 2013-6-19 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是beta-actin一抗给错了？

给的是beta-tubulin？
顶部
逗号是句号[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107985
精华 0
积分 173
帖子 106
信誉分 100
可用分 1246
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
3

发表于 2013-6-19 13:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢你的回答，一抗倒是没错，用的是sigma的，研究室其他人都有用，不知道为什么就是出不来40kda左右的。
后来重新做了一次，这次选了GAPDH的单抗，37附近的条带是出来了，但是同时在50-75一间也出现了一条带
顶部
00无名指00[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76070
精华 0
积分 493
帖子 666
信誉分 100
可用分 4151
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
4

发表于 2013-6-19 13:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

beta-actin不适合用于骨骼肌
顶部
8s5g[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77636
精华 0
积分 469
帖子 538
信誉分 100
可用分 3626
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
5

发表于 2013-6-19 13:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非特异的杂带？
顶部
逗号是句号[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107985
精华 0
积分 173
帖子 106
信誉分 100
可用分 1246
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
6

发表于 2013-6-19 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
beta-actin不适合用于骨骼肌

=====================================================================

为什么呢？我之前也确实看到过这样的经验总结，和我老师说来找，但是原因是什么我不知道
顶部
逗号是句号[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107985
精华 0
积分 173
帖子 106
信誉分 100
可用分 1246
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
7

发表于 2013-6-19 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非特异的杂带？

======================

不知道，难道是二抗的问题？
顶部
9900[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75149
精华 0
积分 399
帖子 478
信誉分 100
可用分 3216
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
8

发表于 2013-6-19 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做WB的时候发现，很多蛋白和Marker指示的位置并不是完全对应的，我的β-actin条带位置也高于42KD，而且重复很多次结果都是一样的，其实WB并不像RT-PCR那样容易出现非特异性条带，毕竟是抗原抗体的特异性反应，所以应该是目的条带
顶部
tuuu2[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77597
精华 0
积分 507
帖子 674
信誉分 100
可用分 4211
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-18
状态 离线
9

发表于 2013-6-19 14:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
beta-actin不适合用于骨骼肌

=============================================

我也想知道为什么，能否说的详细点或是给出相关文献啊？
顶部
BOSS2011[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74568
精华 0
积分 427
帖子 534
信誉分 100
可用分 3476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
10

发表于 2013-6-19 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
和组织不同有关系，也和抗体有关系，我原来用两种不同公司的actin做出两种不同的结果,
顶部