【求助】离子交换去除DNA问题

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标题:【求助】离子交换去除DNA问题

966735obeng[使用道具]
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发表于 2013-6-19 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近试验发现，宿主DNA总是伴随目的物一起洗脱，从盐度0.3一直到1M NaCL，且浓度不一，认为DNA可能片段大小不一，跟柱子的结合力不同，请问，就阴离子柱而言，小片的DNA结合的牢固还是大的染色体DNA结合强呢？

还有一个问题，蛋白与DNA跟阴离子柱结合力那个强？一般是PH低的时候那个会先洗下来，又是为什么呢？谢谢，请指教

junhun[使用道具]
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发表于 2013-6-19 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

无论是核酸还是蛋白质，与离子交换柱结合的强弱与大小无关，只与带电荷的状态有关。

蛋白与DNA跟阴离子柱结合力那个强？这个问题更无法回答。很多蛋白在你的纯化条件下与阴离子交换柱还不吸附呢。

就吸附的情况来说，一般DNA的吸附比较强。应该是蛋白先洗脱。

如果想要用阴离子交换柱来去除DNA，最好选择适合的pH缓冲平衡液，使得目标蛋白穿透或在很低浓度盐条件下洗脱。

反之，如果想要用阳离子交换柱来去除DNA，最好选择适合的pH缓冲平衡液，使得目标蛋白吸附在柱上。

加核酸酶后用分子筛纯化，或在高盐下用疏水层析纯化也可以去除核酸。

taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2013-6-19 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

也有一种情况，你的宿主DNA和目标蛋白有非特异性的结合，可以尝试用些酶后作离子交换。此外，还要测试好你目标蛋白的PI值。这个非常重要。结合柱子强弱与蛋白折叠方式，DNA螺旋方式有关。如果是小段的DNA，则可能带的电荷少，会被先洗下。

966735obeng[使用道具]
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发表于 2013-6-19 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢两位的解答，还想问一下，用核酸酶的话在后期4FF去小片段DNA的时候，核酸酶能否一块去除，需要做检测么？

966735obeng[使用道具]
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发表于 2013-6-19 17:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢两位的解答，还想问一下，用核酸酶的话在后期4FF去小片段DNA的时候，核酸酶能否一块去除，需要做检测么？

c86v[使用道具]
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发表于 2013-6-19 17:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 966735obeng 于 2013-6-19 17:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
谢谢两位的解答，还想问一下，用核酸酶的话在后期4FF去小片段DNA的时候，核酸酶能否一块去除，需要做检测么？

你多大的蛋白能用4FF纯化？

huifeng0516[使用道具]
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发表于 2013-6-19 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

肯定是病毒了，宿主DNA和病毒混合物的分离在国内还没有结果，所以好多疫苗企业止步不前了

avi317[使用道具]
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发表于 2013-6-19 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢两位的解答，还想问一下，用核酸酶的话在后期4FF去小片段DNA的时候，核酸酶能否一块去除，需要做检测么？

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核酸酶可以用阴离子纯化去除，有专门的ELISA试剂盒可以检测。

lixi559[使用道具]
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