小中大HPLC梯度洗脱流动相的选择
做小复方以刺五加中的紫丁香苷定量，作为供试品，实验过程中采用药典方法20%甲醇及加乙酸改善峰型，11分钟左右出峰，但样品中紫丁香苷拖尾因子为1.33，分离度1.87，拖尾因子不符合规定；因此降低甲醇比例——10%甲醇加0.1%乙酸60分钟不出峰；因此在20-10%甲醇之间摸索条件，采用15%甲醇+0.1%乙酸为流动相，拖尾因子1.24，与前面倒峰的分离度033，该条件仍不能达到要求；在以上的基础上采用12.5%甲醇+0.1%乙酸为流动相，拖尾因子0.95，与前面倒峰的分离度1.88，符合药典标准，但保留时间40多分钟，过长，同时同一样品的保留时间差异较大，在42分钟至49分钟之间浮动，而对照品的保留时间一般都在42分钟左右。
为了提前保留时间准备采用梯度洗脱的方式，我应该采用多大的甲醇比例比较合适，这种甲醇比例和等度洗脱流动相比例之间有什么关系比较适宜？
