液相色谱

现在在做食用菌子实体多糖的分离纯化，我用的是DEAE-52的纤维素柱，用0.05到0.5的NaCl 梯度洗脱，1.25ml/min，上样量是1mg/ml 的多糖10ml，每管收集5ml，过了两次，也有峰，但是纯品太少，没办法富集，还想拿到纯品，怎么办呢？

多糖醇沉的时候确实有两层上面漂浮的一层是胶体状的，下面一层是沉淀。胶体状的我没做过，我做的是下面的沉淀。我有以下建议:
建议一：柱子的规格。如果想大量的制备，当然是选择稍稍大的柱子。直径在2.0cm以上。
建议二：你上样量。可以稍稍加大点多糖的上样量。
建议三：多糖的浓度。你上样上了10ml。尽量减小上样体积，提高多糖浓度。
建议四：梯度洗脱的浓度选择。0.05-0.5这个浓度，你是随便选择的。什么浓度是最适合的，是需要实验依据的。你有两种方案选择：1、阶段性梯度洗脱：洗脱液的浓度从0、到2mol/L，选择适当的不同浓度，有低到高依次洗脱并分别收集。2、线性连续性梯度洗脱：洗脱浓度是从0-2mol/L，成线性、连续性洗脱，这种线性浓度你可以在去离子水中一边接入柱子，一边同时匀速加入高浓度的洗脱液2mol/L，同时不断搅拌（磁力搅拌器），使溶液浓度从0慢慢逐步提高。
建议四：你要对以上收集的收集液，逐管或者隔管检测多糖含量，从而来确定主峰的位置。以便选择适当的洗脱浓度，从而优化实验参数。
建议四：细心、耐心加毅力。
祝你试验成功。

非应助，自己也是在学习中，DE52不耐压，如果加大盐离子浓度可以不？不梯度洗脱，直接用一较高盐离子浓度洗脱液洗脱

有几个峰呢？建议从水开始，慢慢的把盐离子浓度增大，一般DEAE收集的组分可以将峰两边一起收集，只用这个填料很难得到高纯度的样品，还需要进一步的分离

每次用一种洗脱液，都有一个峰。但是，我的样品很奇怪，形成的是多糖胶体似的，不是溶液，和水要经过强烈搅拌才和水溶解，不知道是什么东西。上样少了不能富集，多了又飘起来，飘在柱子顶端，我都愁死了

这很正常，真菌多糖很多都是胶体，建议加热或盐溶液溶解，每次用一种洗脱液都有一个峰也很正常，主要是看哪个峰是主要成分，不知道你的柱子规格，一次进样10mg是有点少，需要很长时间才能得到足够的量啊，呵呵

您好，我最近做多糖的纯化，之前有实验室的人留下了SephadexG-100，和DEAE-52，放到冰箱很久，想问一下还能用么？如果能用怎么处理再生？谢谢

楼主问题解决了没？我也在做真菌多糖纯化，过柱子前我把不溶解的给离心掉了，但是发现收集到的多糖分子量只有几千了，真伤不起了，你有什么好的方法吗？

建议你每管收集10ml，每10分钟做一个点，先确定浓度高的时间段，几个不同组分时间段可能不同，把对应的时间段的收集液聚集在一起，在旋蒸浓缩，再不同组分分开，多次过柱，但是光光用DEAE-52的纤维素柱这种离子交换柱来分析你这种天然产物，分析效果不会很好的，一些相似的成分是分不开的，我做竹叶多糖的分离时，在使用离子交换柱后，还要过Sepharose柱，分离效果就很好了，只要分离次数控制得好，相似度很高的成分也能分开，就是Sepharose填料很贵。