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标题:[未解决]做过多糖酶解后HPLC分析的，可以给一些意见么？

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
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发表于 2013-6-22 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做过多糖酶解后HPLC分析的，可以给一些意见么？

急求！！！
我对提取的多糖进行了酶解，之后要用HPLC对水解后得到的寡糖进行分析。但是担心加入的酶试剂会影响HPLC的分析。一方面担心酶会不会堵柱子，还有一方面担心酶的峰会不会影响寡糖峰。
0.22的膜能过掉纤维素酶么？如果不能我该怎么出去这部分酶呢？它的存在会不会影响我的多糖酶解结果分析。
我考虑过sevage去蛋白，但是那样之后要进行透析，我担心透析的过程会把水解得到的寡糖去掉了。
有没有哪位前辈做过多糖酶解后HPLC分析的，可以给一些意见么？
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誓言@谎言[使用道具]
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发表于 2013-6-22 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
会堵柱子，酶蛋白的分子量太大，色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质，纤维素酶水溶性的，溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。
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发表于 2013-6-22 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
无论使用示差检测器还是紫外检测器，预处理正规操作，色谱条件合理，即使出峰，影响也不大。
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mico_11[使用道具]
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发表于 2013-6-22 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我之前也怕会堵柱子 但是以前进糖样品的时候，有些糖没有脱蛋白，进样也没有关系。是不是因为糖蛋白的分子量比酶要低，所以没事？
另外，我看有些文献里面写着，加入三倍体积乙醇，再过膜，进样。多糖是不容易乙醇的，那我酶解后生成的低聚糖呢？能溶解于乙醇么？会不会受到影响？
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发表于 2013-6-22 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
分子量越小越易溶解于乙醇 越大越不溶  我也在做水解 可是我有些预备工作没做好 能请教你么？？？
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发表于 2013-6-22 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议反应后，离心10000x RPM 10 分钟来沉淀 酶。低聚糖应该没事。 还有有些柱子用有机溶剂可能不好。 不知道你什么方法测糖，我觉得酶应该对糖没什么影响。
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发表于 2013-6-22 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用氯仿/异戊醇去蛋白？或者加热变性过膜去蛋白？
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hey_bye[使用道具]
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发表于 2013-6-22 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想请教你一下，你水解多糖的方法是什么，我是这方面的初学者，望赐教
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青青子衿[使用道具]
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发表于 2013-6-22 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你那个酶不是可以直接灭活么？？？我使用酸解的~~~
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兜兜[使用道具]
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发表于 2013-6-22 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
酶分子量多少？用量多少？0.22um肯定滤不掉，可以考虑用超滤膜。另外色谱柱如果用300A的，对于分子量几万的酶是可以耐受的。做的时候要平行做空白哦
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