小中大参照Wack等人的方法,分别取多糖EPS-1和EPS-2各5 mg,加入2 ml的2 mol/L三氟乙酸(TFA)在120 ºC水解2 h,或加入2 ml的0.2 mol/L TFA在80 ºC水解30 min;水解液减压蒸干后,再加入少量甲醇减压蒸干(重复3次)以除去残留的TFA[9]。
然后,参照张惟杰报道的方法,制备多糖水解样品的三甲基硅醚衍生物:即向上述的多糖水解样品中加入1 ml吡啶、0.4 ml六甲基二硅氮烷和0.2 ml的三甲基氯硅烷,于80 ºC下反应30 min;再加入1.5 ml蒸馏水并震荡,待溶液分层后,1000 rpm离心10 min,取上层吡啶层进行气相色谱分析[3]。使用Agilent 6890N型气相色谱仪、HP-5色谱柱(5% Phenyl Methyl Siloxane Capillary,30 m × 0.32 mm × 0.25 mm)和火焰离子检测器(FID),色谱条件如下:以氮气为载气,流速为1 ml/min;进样口和检测器的温度分别为250 ºC 和280 ºC;采用程序升温:起始温度100 ºC维持5 min,以5 ºC/min升至150 ºC,并于150 ºC维持5 min,最后以5 ºC/min升至240 ºC,并于240 ºC维持2 min;采用不分流进样,进样量为1 l。
同理,按上述方法制备标准单糖的三甲基硅醚衍生物并进行气相色谱分析,根据标准单糖衍生物和样品保留时间保留时间的比较以确定EPS-1和EPS-2的单糖的组成,并根据标准单糖衍生物和样品各色谱峰的面积来计算单糖组成的摩尔比。