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标题:[未解决]胶原蛋白电泳遇到一些麻烦求助！

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
today@[使用道具]
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发表于 2013-6-22 20:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶原蛋白电泳遇到一些麻烦求助！

我是做畜产品中胶原蛋白，想测定其中I型和III型胶原蛋白的变化。咱国人的做法是对这两种胶原蛋白分别提取去测含量跑电泳。但是国外的做法是用CNBr处理标准的I型和III型胶原蛋白，会出现两条特征条带，以此作为两种类型胶原蛋白的定性方法。对于我的试验完全没有必要去分步提取2种胶原。所以我打算做这种方法的电泳。请问有没有大神做过这方面的研究？？？？？ 关于CNBr的裂解问题具体有什么要求呢？貌似这个氰化物属于剧毒品，操作上要注意什么啊？至于裂解后的特征带的分子量大概是多少我始终找不到文献有说清的？哪位大神可以指教啊？或者提供给我一个更好的同步测定I型和III型胶原蛋白测定方法？
   急求了！！！！！
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发表于 2013-6-22 20:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以不同裂解，直接用电泳，加尿素可以将I型胶原和III型胶原的a条带分开，就可以测得它们的相对含量了
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80年代的人[使用道具]
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发表于 2013-6-22 20:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
SDS-PAGE  本来就是变性电泳啊。。。。我拿一型标准胶原 跑出来  三个条带 很清晰啊  你说的裂解是什么概念啊？
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发表于 2013-6-22 20:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
问一下。我仔细看了一下文章，那篇溴化氰裂解的我看过。另外一篇我再仔细读一下，的确给出了一个一步鉴定I型和III型胶原的方法。但是请问这个方法对于可能含有多种胶原类型的样品适合吗？
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发表于 2013-6-22 20:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
要是要测定含有多种胶原类型中的I型和III型胶原的变化，这样也是可以的吧？  如果我酶解处理过的样品呢？是否还能用个方法吗？
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疲惫黑眼圈[使用道具]
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发表于 2013-6-22 20:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
I型和III型为主要的时候，其他的胶原蛋白都可以忽略的，含量太少，除非你单独把它提取出来。酶解处理的样品可以用啊
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艾玛@加油[使用道具]
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发表于 2013-6-22 20:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
THE SEPARATION  OF TWO SOFT-TISSUE  COLLAGENS BY COVALEN  CHROMATOGRAPHY 。按着这个文献所说的，即是用蛋白酶进行水解后，用DTT进行还原。然后过G25和被溴化氰活化的琼脂糖4B柱。后来过了羧甲基纤维素柱，和前期的标准物比吧得出的。原理就是还原后可以被吸附的是III型胶原（多含分子间二硫键），不能被吸附的是I型胶原。然后电泳就可以一步分离了。请问假设我只参考这个电泳图，我就能确定我跑出来的条带是我要的I和III的特征带吗？ 我也没有必要过后面那个羧甲基纤维素柱再去做一堆标准去做比照。能给出大概的分子量的范围吗？一般一条链也就100kda？可这个？还是只要去跑，结果就是这个样子的？
   十分感谢！！
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=心晴=[使用道具]
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发表于 2013-6-22 20:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在做这个，我购置I型和III型的胶原做标样，相同处理后上样，比照这两种标样的这个特征带去定性可以吗？  貌似没有人这样做过。我之前提到的溴化氰裂解的那个是这个思路，但是他看的是裂解的条带。我这样做的话 合理吗？
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不化妆的lay[使用道具]
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发表于 2013-6-22 20:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以这样做，但III型胶原好像比较贵
祝你实验顺利吧
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哦买噶[使用道具]
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发表于 2013-6-22 20:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不必要那么复杂吧，你只要确定前后两次电泳的样品的浓度，比较前后两次电泳中III型胶原条带的光密度就可以了，或者比较前后两次样品中I型和III型胶原的比例，这样就可以比较出变化啊
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