样品前处理

我制取的粗酶液没有任何酶活，原因可能是酶失活或者根本没提出SOD酶，下面是我的制取方法，求前辈们指点或提出更好可行的办法。

取20g玉米胚芽，用粉碎机粉碎，以液料比3:1,4:1,5:1的比例在胚芽中加入pH7.8的50mmol/L的磷酸钠缓冲液，浸提1小时，用四层纱布过滤，在10000r/min  4℃下离心20min，上清液即为SOD的粗酶液，于4℃冰箱中保存，测其蛋白质含量与酶活，选出最适液料比。酶活我采用改进的邻苯三酚法（GB/T5009.171--2003）测量。

我认为可能是粉碎过程酶失活，那可以加些冰屑来降温；或者浸提过程中酶根本没浸出，因为SOD属于胞内酶，那是否可用超生波破壁；或者其他什么原因。希望前辈们可以尽快给予帮助，不胜感激。

补充下：测酶活，325nm下  空白样邻苯三酚自氧化速率△A325≈0.060，加样液后
△A′325≈0.060。多次测量均是。所以认定基本零酶活。

你好，我最近也是采用改进的邻苯三酚法（GB/T5009.171--2003）测量SOD酶活，但测出来的△A325并不等于0.06左右，且平行试验测出来的数据都不一样，相差挺多的，也改了很多条件，但测出来的结果也是一样，没有规律性，所以想向你请教几个问题，不知是否可以：
1、你配的试剂和测活操作步骤都是按照GB/T5009.171--2003里来的吗
2、tris-Hcl缓冲液的pH值是8.20左右吗，我按照标准里面的加样量配出来的tris-Hcl缓冲液的pH并不是8.20。
3、测△A325时采用对照组是仕么，蒸馏水吗，或是除了以10mmol/l盐酸代替邻苯三酚之外，其余的跟空白样是一样的呢？
4、测△A325和△A′325时，有没有先将未加B液之前的混合液在25度下保温25min左右呢？

加入B液后，混合的时间大概有多久呢？加入B液开始反应后，混合液的颜色呈黄绿色吗？我加完之后并没有看到黄绿色，不过几分钟之后溶液是呈黄色

你测的△A325和△A′325是只测混完后和1min后的吸光值相减得到的吗，有没有多测几分钟，有的话，每分钟的△A325和△A′325都≈0.060吗，有文献说邻苯三酚自氧化速率在最初的3~4min内会与时间成线性关系

在表1SOD活性测定加样表里样液和SOD液的加样体积总和并不等于空白样的4.5ml，看过很多采用邻苯三酚测SOD活性的文献资料，资料里对照管、空白管、样品管所加的体积都是一样的，你测△A′325时是按表1加的量吗？

你测吸光值时采用的是比色杯吗

希望能够得到你的回复。

你测的△A325和△A′325基本相等，可能是没有酶活或活性很低，原因可能就是你说的这几个，我之前看过相关的文献，粉碎研磨植物组织时都要在低温下进行，另外你离心的时候转速是不是有点高呢