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标题:[未解决]先用H2O洗脱多久才换用NaCl洗脱？

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
莫莫莫[使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先用H2O洗脱多久才换用NaCl洗脱？

最近在做DEAE  Sepharose-CL6B凝胶柱层析纯化阿拉伯木聚糖的实验，用的层析柱还有自动收集仪。看到有些文献上是先用H2O、再用0.1mol/l的NaCl洗脱，但是不知道先用H2O洗脱多久才换用NaCl洗脱？还有怎样判断样品已经洗脱完了呢？（我是把收集的洗脱液显色后测定吸光度，总不能洗脱100管挨个测吧，这也太无奈了）。请问有哪位大侠做过这些的，求助啊~~
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千里之外[使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为什么需要色谱分离阿拉伯木聚糖？这个东西可以大量提取获得才对呀？
洗脱液OD值和总糖含量关系可能不大。用地衣酚盐酸法测定总戊糖是靠谱的方法。
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grace![使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是想用层析的方法洗脱得到不同分子量的阿拉伯木聚糖，层析之后再用高效液相检测其分子量大小，最终能得到某一数量级的阿拉伯木聚糖，如100000.
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发表于 2013-6-22 23:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
理论上讲：每管都测一下OD值，才能确定哪些管可能是单一组分，主要还是便于收集。不过，也有偷懒的，就是隔管检测，你可以考虑一下隔几管测一下。
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hero_b[使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我看文献上是先用DEAE Sepharose-CL6B阴离子交换柱层析，像上面图中有三个洗脱峰，就代表有三个糖组分，我不太明白为什么只根据洗脱峰就可以判定是不同的糖组分呢。然后再用Sepharose-CL4B凝胶色谱柱层析，也是根据洗脱峰判定，总觉得有点牵强
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迷糊小鬼[使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这么说吧，你觉得同一个糖组分会在2个流动液里面分别流出来吗？
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apple_danny[使用道具]
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发表于 2013-6-22 23:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不同的洗脱剂是应该洗脱得到不同的洗脱峰，嗯，明白了。至于得到的是不是一样的组分，后面还需再用其他方法检测一下。请问你做多糖的层析纯化吗
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