在尿样中内源性代谢产物GC-tof-MS检测方法建立中遇到一个问题
平时使用气质主要是用来测定各生物样本中各内源性代谢产物，经验不多，想跟大家分享一下尿样检测方法的建立过程遇到的一个很久才得以解决的问题。
1、 仪器
Agilent 6890N gas chromatograph and Waters Micromass GCT mass spectrometer
DB-5 MS capillary column
2、 样本预处理
使用MSTFA对样本中各物质进行三甲基硅烷化衍生化处理，以提高样本中各物质的挥发性。
3、 遇到的问题
在条件摸索过程中突然出现不出峰的现象。
在尿样中含有多种内源性代谢产物，利用这台GCT仪器，正常情况下至少可以检测到100个以上的谱峰，但在一次条件优化过程中突然无规律的出现出峰数量明显减少的现象，见图1。
图1 出峰数量明显减少时得到的总离子流色谱图。
分析后，总结造成这种情况可能的原因如下：
样品自身原因
进样问题
仪器自身原因
尿样中某些物质对仪器造成影响
针对上述四种假设，一次排查。
1） 对同一份样本连续多次进样，见图2。
图2 同一份样本连续进样四次，所得到的总离子流色谱图。
这样可知，出现这种现象并非由样本预处理不好，未衍生化完全造成的。
2） 进样的考察
更换进样人，反复尝试，依然存在此问题。
3） 仪器自身原因的排查
清洗衬管
更换隔垫
烘烤毛细管柱
清洗离子源
完成上述处理后，重新进样考察，但仍然出现与之前类似的问题。
其实做到这里是很郁闷的，整个排查过程总共用了很多天，但始终没有方向，感觉每一条路都被堵死，越来越混乱，也考虑了是否是样本中某种物质会干扰仪器，但由于这并不是最初的条件优化，之前很多次并没有出现问题。之后很偶然的想到了，是否是进样针出现了问题，因此特地买了支安捷伦进样针，没想到问题就这样解决了。其实，长时间使用的进样针会出现密闭不好的问题，这样吸取样本的量就受到很大的影响，最终导致了我上面所提到的问题，不知道各位的进样针多长时间更换一个，我是遇到了这个事才真正意识到这个问题。
另外气相进样针有两种，一种是锥形针尖的进样器，一种是锐尖针尖的进样器，但推荐使用锥形针尖的进样器，因为锐尖针头会扎碎进样口隔垫而导致泄漏，同时还因为其从隔垫抽出时被隔垫擦拭，从而引起色谱图上大的溶剂峰拖尾。如图3。
图3 进样器针尖
4、 心得
其实这个例子没有特别复杂的技术问题，讲给大家听只是想说其实在平时做实验遇到问题的时候，总是先想到比较复杂的、影响比较大的原因，而往往忽略了最简单的可能性。
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本帖最后由 tang1986gdfs 于 2009-12-31 10:41 编辑 ]
