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标题:[未解决]有谁测PPO得么'?遇到一些问题！

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
雨儿[使用道具]
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发表于 2013-6-24 18:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有谁测PPO得么'?遇到一些问题！

我昨天测多酚氧化酶的时候发现我的所有处理测出来的数值都没有差异
并且颜色也很淡..
是那种淡黄色的...
有谁测PPO得么'?
把方法和一些问题一起谈一下..
求交流....

我的PPO测定是 3.8ml缓冲液+0.2ml酶液+1ml邻苯二酚 30°反应10min 用1ml 10%磷酸终止反应测定在525nm处的吸光度
我的样品是枣.
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落叶无声[使用道具]
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发表于 2013-6-24 18:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多酚氧化酶）的测定
酶液制备：取10g 去皮果肉，加0.5PVPP0.2 mol/L磷酸缓冲液（PH=6.4）中，冰浴研磨，4℃冷冻离心机12000rpm离心20min，取上清液测定酶活性。
活性测定：将0.2ml粗酶提取液加入3ml0.05moL/L（用0.2 mol/L（PH=6.4）磷酸缓冲液配成）中。反应温度为30℃，加酶液开始扫描30秒内398nm处吸收光值变化，以每分钟△OD398nm变化0.01表示一个酶活性单位（△OD398nm/0.01wt）。
PPO酶活性（0.01△OD398/g(FW)min-1）=△OD398/0.01wt
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发表于 2013-6-24 19:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的不知道是酶活太低了还是怎么的颜色不明显..吸光值也很小.
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发表于 2013-6-24 19:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多酚氧化酶测定的时候有颜色 或者是什么标准来肉眼判断酶活性么?
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舞疯[使用道具]
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发表于 2013-6-24 19:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的酶液纯化了吗？是不是测定的时候吸光值跳动很厉害？如果是的话，你可以选定刚放进去样品时的吸光值和反应剧烈的终点吸光值之差反应活性大小，但是要记录这段时间。最后根据你的计算公式算。个人建议哦。
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翔少爷[使用道具]
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发表于 2013-6-24 19:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的酶液是研磨样品得的提取液..
不需要纯化的吧..
PPO测定的时候是不是会变色?
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小米粒[使用道具]
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发表于 2013-6-24 19:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主能否给一篇关于所分氧化酶的英文文章啊？谢谢啊谢谢
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