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标题:[未解决]储备液稀释后一小时内吸光值就由0.685下降到0.432求助

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
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发表于 2013-6-25 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

储备液稀释后一小时内吸光值就由0.685下降到0.432求助

最近在做ABTS自由基清除试验，可是发现工作液的OD值一直在下降，这样试验就没法做下去了，不知各位有没有这种情况的发生，如果有，如何解决的，非常感谢！
我的做法如下：
储备液1：7 mM ABTS水溶液
储备液2: 4.9 mM 过硫酸钾水溶液
母液：将储备液1和2等体积混合，室温避光反应12-16h
工作液：将母液用pH 7.4的磷酸缓冲液稀释至OD734=0.7±0.02
以上是引用其它同学的发帖，相同的配制方法也遇到相同的问题，储备液稀释后一小时内吸光值就由0.685下降到0.432，这样就不能用了啊，急请做过的大侠帮帮忙！十分感谢！
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80年代的人[使用道具]
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发表于 2013-6-25 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的方法和你的有点不一样，过硫酸钾用的是2.45，工作液是用无水乙醇稀释的，我做出来的效果还可以。
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发表于 2013-6-25 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的混合比例是1:1，另外，你做几组之后，就测一下abts的od值，校正一下，会好一些吧
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发表于 2013-6-25 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种试剂确实需要现配现用，且要低温避光保存
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疲惫黑眼圈[使用道具]
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发表于 2013-6-25 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现配现用，每次做之前稀释到吸光值0.7，这样也不麻烦的
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艾玛@加油[使用道具]
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发表于 2013-6-25 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种自由基本身就很不稳定，吸光值降低是正常现象。所以，一定要现配现用，如果样品较多，中间可以重新校正下。
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=心晴=[使用道具]
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发表于 2013-6-25 11:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再请问一下，工作液一般都是用缓冲液稀释，您怎么用的无水乙醇呢？
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不化妆的lay[使用道具]
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发表于 2013-6-25 11:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
ABTS自由基要现用现配，ABTS最好用进口的，我用的变化没有那么快！
几组样品，最好是同时做，这样才有可比性
如果有条件，建议用酶标仪做，先在96孔板里面加相应样品溶液，后用排枪加调好吸光度的ABTS溶液，这样做很准
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发表于 2013-6-25 11:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
每次测定前要调整到0.7，但不一定要用母液稀释，可以用稀释倍数低点的来加到吸光度变低的ABTS里面
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集贤阁[使用道具]
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发表于 2013-6-25 11:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是用无水乙醇配的两种溶液，等体积混合制备母液，然后用无水乙醇稀释，过程中一定要避光，我用了一天，变化不大
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