【求助】大肠杆菌表达的蛋白占大肠杆菌...

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标题:【求助】大肠杆菌表达的蛋白占大肠杆菌...

6327555[使用道具]
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发表于 2013-6-27 11:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用大肠杆菌表达了一种蛋白质,想测定其占总的大肠杆菌蛋白质的含量,不知道如何测定,听说过一种灰度扫描什么的,请教那位高手!

04906[使用道具]
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发表于 2013-6-27 11:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，其实我就是目测一下。你也可以用软件BandScan来估计。

any333[使用道具]
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发表于 2013-6-27 11:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

灰度扫描并不是件很容易的事，前提是你的胶做的很好，但一般情况下我们实验室自己至的胶往往很难分出漂亮的条带，看SCI文献中特别清晰的带会感到很郁闷，估计他们用的是预制胶。

胶跑的比较好的前提下才有必要用软件进行测定，因为这类的软件主观性还是很大的，只是半定量分析，如果胶本身跑的不是很好，我个人感觉没太大的必要去做那个分析。

常用的此类软件有Quantity One、BandScan及QScan等，随便下一个用用就是。

jujuba[使用道具]
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发表于 2013-6-27 11:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

总蛋白含量可以破碎菌体后，离心，取上清（得保证你的蛋白是可溶性表达）然后常规方法SDS—PAGE，bandscan粗略测一下相对量还可以吧。

04906[使用道具]
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发表于 2013-6-27 11:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

SDS-PAGE没有那么难，保证各种试剂新鲜一点，操作上多注意，洗脱的时间久一点，条带会非常漂亮，底色是透明的，我认为完全可以用软件分析。