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标题:【求助】分离胶的浓度问题

caihong[使用道具]
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发表于 2013-7-1 18:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】分离胶的浓度问题


我在跑非变性电泳时，在接近溴酚蓝端有比较多条带，我希望这些带能比较接近胶的中部，请问我该如果调整，能不能反分离胶的浓度变大
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2013-7-1 18:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想可以适当提高分离胶浓度，另外不必等溴酚蓝跑到胶的底部。
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49888[使用道具]
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发表于 2013-7-1 18:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不让溴酚蓝跑到底部应该是比较难把握的
一是重复性方面的控制
另外，不跑下去即相当于分离胶长度比较短，是否会造成蛋白分离不充分

提高凝胶浓度可取！
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2013-7-1 18:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实,你不一定要把那些带都处理到中间,只要能把目的条带和其他杂带分离开来就行, 可以根据目的蛋白的大小选择相应的分离胶浓度,如果分离效果还不好的话可用梯度胶试试!
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发表于 2013-7-1 18:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的目标蛋白分子量应该比较大吧

增加分离胶的胶浓度应该可以解决这个问题

我觉得一般目标蛋白处于胶的中间1/3范围之内比较好。
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caihong[使用道具]
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发表于 2013-7-1 18:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我先是跑了均匀胶，带位于接近溴酚蓝的地方，请问，这说明我所要的目标蛋白分子量是偏大还是偏小，怎么根据带的位置选择分离胶
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bs4665[使用道具]
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发表于 2013-7-1 18:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我先是跑了均匀胶，带位于接近溴酚蓝的地方，请问，这说明我所要的目标蛋白分子量是偏大还是偏小，怎么根据带的位置选择分离胶

==================================================================

你的意思是目标条带接近电泳胶末端了？

那这样的话说明你的目标蛋白分子量较小，应该增加分离胶的胶浓度才可以是条带往上移。
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2013-7-1 18:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对应该增加分离胶的浓度，凝胶浓度的选择是跟分子量相联系的，参考如下：36kd-205kd 5%;24kd-205kd 7.5% ;14kd-205 kd 10%; 14kd-66 kd 12.5%; 14kd-45 kd 15%(from amersham pharmacia biotech)
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89tongzijun[使用道具]
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发表于 2013-7-2 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
原来胶浓度和分子量之间还有这么具体的对应关系哦，我前段时间跑一个MARKER（14KD）的一直没跑出来，后来就增加胶浓度到15%，结果还行，以后我就更知道用什么浓度胶了，谢谢！
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2013-7-2 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以先做一个SDS来确定你的分离胶的浓度，再根据你做双向的图谱和你的目标蛋白来摸索你的分离胶的浓度，比如我近来做的一个样经过SDS和一次双向最终确定为11.5%较合适。
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