小中大对您实验中出现的问题表示同情。
关于克隆鉴定的假阳性,很多帖子中都有讨论。你就是把假阳性当成阳性克隆了,这不是什么大问题。不要乱了方寸。
估计你做菌液PCR的时候用的是基因自身引物?如果那样的话假阳性的几率会比较高。我曾经做过一个,40个菌落个个都有带,当时我就马上用载体引物再做了----几乎是不可能的啊。
pET22b这个载体还是比较好做的,因为载体本身不是特别大。如果你的插入基因达到700 bp左右可以考虑做cracking gel,我一般比较相信
1. 载体上引物的PCR结果;
2. cracking gel的结果,假的特别少;
3. 酶切结果
当然最终你还是要测序的,
祝好运