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标题:【求助】westernblot 条带 呈笑脸的原因？

vcve[使用道具]
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发表于 2013-7-15 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】westernblot 条带 呈笑脸的原因？


显影出来GAPDH的条带 每个都呈弧形，就像嘴巴微笑时呈的弧度，同时做的其他蛋白显影出来就没这个问题，请大家帮忙分析分析
上样蛋白量是50微克
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2013-7-15 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上样量有点大
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8princess8[使用道具]
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发表于 2013-7-15 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“ 微笑”（两边翘起中间凹下）形带原因？
主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中。
处理办法：待其充分凝固再作后续实验。
“皱眉”（两边向下中间鼓起）形带原因？
　　主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。
处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2013-7-15 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得可能是胶不够均一造成的，方法是充分混合同时减少APS，延长凝固时间，这样可以避免局部不均一。
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发表于 2013-7-15 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.上样量50ug并不大
2.同意zhaoy02007的看法。
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vcve[使用道具]
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发表于 2013-7-15 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是我没说清楚，不是胶呈微笑，是显影出来的条带，每一条都是微笑状的
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发表于 2013-7-15 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

但最后的显影都是从最初的跑胶的条带一步步来的啊，如果最初胶上就微笑了，那自然就会将微笑进行到底了啊：）
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2013-7-15 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得是不是这样的，western 怎么说也是抗原抗体反映。他的精密度很高。有一点儿蛋白就能看出来。 sds没有那么精确，可能只是看不出来，并不是没有。
所以还是page胶的问题导致后面的微笑表情。楼上说得很对
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qhyu[使用道具]
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发表于 2013-7-15 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

注意梳孔是否整齐？
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发表于 2013-7-15 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道LZ胶浓度是多少？
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