蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】如何去除蛋白质溶液中的碳酸氢铵

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 15  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】如何去除蛋白质溶液中的碳酸氢铵

minran_1980[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75816
精华 1
积分 339
帖子 293
信誉分 102
可用分 2344
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
1

发表于 2013-7-16 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】如何去除蛋白质溶液中的碳酸氢铵


现在有要对胰酶消化的肽段溶液进行除盐（碳酸氢铵），然后进行后续的实验。鉴于碳酸氢铵具有挥发性的特征，因此有文献介绍可以用真空离心浓缩的方法（但没有细节）！碳酸氢铵的性质比较特殊，在60摄氏度即可完全分解，那么如果真空离心的时候，温度设定为60摄氏度，虽可促进碳酸氢铵的分解，但是否也极有可能应先个肽段的稳定性？请各位大侠，有经验，感兴趣的，畅所欲言！
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
2

发表于 2013-7-16 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

买几个小分子量的超滤管，离心去除你不想要的盐
顶部
any333[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 76446
精华 1
积分 1533
帖子 2542
信誉分 102
可用分 13711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
3

发表于 2013-7-16 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

C18去除盐份，超滤管 不可以用，因为已经消化为肽段了
顶部
49888[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
4

发表于 2013-7-16 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

肽稳定的话,直接加热可分解.还可抽真空.因为它是挥发性盐.
顶部
moonlight45[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79769
精华 0
积分 487
帖子 654
信誉分 100
可用分 4096
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
5

发表于 2013-7-16 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

几乎没有可能影响肽段的稳定性。大部分文献都是用碳酸氢铵做酶解的，还有用iTRAQ时候用TEAB，最后都是真空干燥的，这是标准操作。如果你担心的话可以把温度降到30度以下，或者用冷冻干燥。而且高温就会影响肽段稳定性吗？没有这方面的经验，但是我记得有时候我们还煮肽段做western blotting，好像也没有什么影响。
顶部
minran_1980[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75816
精华 1
积分 339
帖子 293
信誉分 102
可用分 2344
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
6

发表于 2013-7-16 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
买几个小分子量的超滤管，离心去除你不想要的盐

====================================

超滤管的最小分子量为3KD，对肽段不太适用。
顶部
minran_1980[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75816
精华 1
积分 339
帖子 293
信誉分 102
可用分 2344
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
7

发表于 2013-7-16 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
C18去除盐份，超滤管 不可以用，因为已经消化为肽段了

=================================================

C18除盐也是一个很好的方法，不过这个过程肯定会有肽段的损失。
顶部
minran_1980[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75816
精华 1
积分 339
帖子 293
信誉分 102
可用分 2344
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
8

发表于 2013-7-16 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
肽稳定的话,直接加热可分解.还可抽真空.因为它是挥发性盐.

===================================================================================================

我专门请假了蛋白质组学领域的以为大牛，他说用室温真空离心干燥即可将碳酸氢铵挥发。碳酸氢铵为什么会在真空离心时直接挥发呢？
顶部
minran_1980[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75816
精华 1
积分 339
帖子 293
信誉分 102
可用分 2344
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
9

发表于 2013-7-16 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
几乎没有可能影响肽段的稳定性。大部分文献都是用碳酸氢铵做酶解的，还有用iTRAQ时候用TEAB，最后都是真空干燥的，这是标准操作。如果你担心的话可以把温度降到30度以下，或者用冷冻干燥。而且高温就会影响肽段稳定性吗？没有这方面的经验，但是我记得有时候我们还煮肽段做western blotting，好像也没有什么影响。

=============================================================================================

谢谢，你在真空离心干燥时，采用多少温度呢？我感觉这其中所需的时间太长，比如0.5mL的碳酸氢铵溶液可能需要好几个小时。
顶部
junhun[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77185
精华 0
积分 561
帖子 781
信誉分 100
可用分 4746
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-14
状态 离线
10

发表于 2013-7-16 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为铵很容易分解，特别是碳酸氢铵，真空或加热可分解为氨气，二氧化碳。
顶部
 15  1/2 12››