【求助】近期要做小鼠海马的DIGE，有做过的前辈指点一下~

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标题:【求助】近期要做小鼠海马的DIGE，有做过的前辈指点一下~

079777chao[使用道具]
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发表于 2013-7-16 13:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

近期要做小鼠海马蛋白质组学，用DIGE的方法对于样品处理有特殊要求吗？小鼠的海马特别小，加入裂解液后如何破碎呢，是研磨还是超声呢。还有就是预算方面比传统的2-DE会贵很多吗？还望各位不吝赐教，谢谢~~

ffooll[使用道具]
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发表于 2013-7-16 13:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

DIGE的样品处理和普通2DE基本一样但是样品处理中均不能加DTT和IPG buffer 这两个东东会干扰染料标记
加入裂解液可以用匀浆器将组织打成匀浆预算的话DIGE一张胶我们做的大概在3500---4000RMB之间吧

079777chao[使用道具]
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发表于 2013-7-16 13:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果用匀浆器的话可能不行吧，因为我用的是小鼠，海马特别小，我看文献里有说的是用枪头捣碎呢。另外麻烦问下您是哪个单位，如果可以的话可以多跟您学习一下。

yes4[使用道具]
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发表于 2013-7-16 13:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

直接超声破碎即可，脑组织很脆弱的。

jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2013-7-16 13:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们用的是专门的组织研磨器，自动化的用液氮研磨效果也一样的

abc816[使用道具]
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发表于 2013-7-16 13:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

DIGE远远比普通双向贵一些，一块胶的成本大概3000-4000，关键看你50ug用多少染料标记，一般的话100-400pmol都可行，GE公司推荐的是400pmol。样品制备注意不加DTT和IPGEbuffer和两性电解质就ok。标记之前注意调节样品PH到8.5

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发表于 2013-7-16 13:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

直接超声破碎即可，脑组织很脆弱的。

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嗯，我看一些文献里确实是用超声破碎的，我再跟老师沟通下看看~

079777chao[使用道具]
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发表于 2013-7-16 13:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们用的是专门的组织研磨器，自动化的用液氮研磨效果也一样的

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哦，是这样啊，那我再问下合作单位吧，我们没有设备需要借用外单位的。

079777chao[使用道具]
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发表于 2013-7-16 13:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

DIGE远远比普通双向贵一些，一块胶的成本大概3000-4000，关键看你50ug用多少染料标记，一般的话100-400pmol都可行，GE公司推荐的是400pmol。样品制备注意不加DTT和IPGEbuffer和两性电解质就ok。标记之前注意调节样品PH到8.5

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嗯，知道了，到时候再摸下条件吧，看看到底标记多少效果会好一点，希望最后能出个好点的结果吧