【求助】有没有做血清蛋白质组的？

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标题:【求助】有没有做血清蛋白质组的？

huifeng0516[使用道具]
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发表于 2013-7-16 18:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
系统性红斑狼疮
我打算做正常人和病人(系统性红斑狼疮)的血清蛋白质组学,请问应该注意哪些问题?这种研究太费钱了,我都不敢动手做,请做过的高手提供的经验和技巧.

avi317[使用道具]
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发表于 2013-7-16 18:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

血清蛋白质组研究中的一个大问题是高丰度蛋白质的干扰.有些公司有卖去除高丰度蛋白试剂盒,你可以查查.做蛋白质组真的很费钱呀

avi317[使用道具]
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发表于 2013-7-16 18:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

血浆蛋白质组学的确很费钱，需要注意样品采集过程中一定要咨询经验丰富的人，以免样品采集失败，另外还要注意采集过程中的蛋白降解问题，保持所有样品的一致性，血浆蛋白质组学中去除高丰度蛋白现在有成熟的技术，可以查一查，总之是可以做，需要钱，有难度．

vivian4123[使用道具]
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发表于 2013-7-16 18:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

主要两个问题，一个是样品例数，不够的话不足以证明差异的真实性，好比国内有些研究，那么少的例数出的差异完全是自欺其人，这个问题牵扯到了研究经费的问题，如果经费不是那么充足，可以分布来做，尝试发现/探讨方法－－发现差异－－严重差异－－鉴定差异；另一个是血清采集的方法和血清处理的方法，并不说一定要去掉高丰度蛋白，跟手段和要求有很大关系的。

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发表于 2013-7-16 18:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是做血清蛋白质组学的,感觉和您一样,因为实验成本太高而无法下手.不过我知道伯乐Bio-Rad公司有一种试剂盒可以去处高丰度的白蛋白和IgG,不过我也没有用过,仅仅给您提供一个信息.希望以后多交流,

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发表于 2013-7-16 18:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

安玛西亚公司也有类似的试剂盒，我订购的刚刚到货，还没来得及研究

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-7-16 18:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有没有用过去白蛋白和免疫球蛋白试剂盒的同志出来说个实践经验来听听啊，伯乐的好像盐浓度太高，基本上不好用；安马西亚的没听过；听说SIGMA的非常不错，有文章为证。

敬候高手分解！

orangecake[使用道具]
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发表于 2013-7-16 18:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们在做人类和大鼠,跑出来效果还可以,没有去掉高丰度的白蛋白和IgG,关键在标本的预处理中采用了超速冷冻离心后,可以直接上样,跑一向时可以加入滤纸去盐

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2013-7-16 18:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大家上样量一般是多少呢（17cm的胶条）？

我怎么觉得盐对聚焦的影响不是很大

wu11998866[使用道具]
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发表于 2013-7-16 18:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做血清蛋白质组的好消息是不怕做不出阳性结果，坏消息是结果很难重复
目前最大的问题就是血清中各种蛋白质的丰度差异较大(10^0~10^-9)，现有技术分辩能力在10^-4~10^-5，而预计发现新的Bio-marker的范围大概在(10^-6~10^-8)。
现有的各种去除高丰度蛋白的办法只是没有办法的办法，各公司的Kit又贵的要命，而且处理能力有限(17cm的胶条一个肯定是喂不饱的)。在去除某个高丰度蛋白后，原先次高丰度的蛋白成为主要障碍并仍能限制低丰度蛋白的显示；而且有相当蛋白与白蛋白等高丰度蛋白相互作用，去除过程不可避免的也丢失了相关信息；退一步，即使彻底去掉这些高丰度蛋白，以目前2D的染色方法，要看到这些低丰度蛋白，该上多少样？需要多少原始样品(血清)？

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