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标题:【求助】SDS-PAGE之怪现象(蛋白电泳 漏样)，求解

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发表于 2013-7-17 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE之怪现象(蛋白电泳 漏样)，求解


跑了4年的蛋白电泳了，最近处现在浓缩胶，样品“漏下去”的现象，导致混样。更换配电泳的试剂，仍未解决。样品是大肠杆菌表达菌体。同时也发现10次有9次漏，也能碰上不漏的情况。

焦急万分，为此，我常偷偷哭泣，肯请战友解答，感激。


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2013-7-17 11:30
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2013-7-17 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我昨天做了一次电泳，发现下方总有一条红色的线，随着电泳进行而前进，很像楼主图上下面那条线，不知道是不是也漏胶
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发表于 2013-7-17 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感觉还是胶的问题，胶和玻璃板、浓缩胶和分离胶之间都有空隙。
玻璃板是不是夹得太紧了啊，这样拔梳子的时候容易出这样的问题
还有就是胶配好后放冰箱也容易出这样的问题
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发表于 2013-7-17 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳装置是BIO-RaD的，还凑合。

凝胶是放在28度温箱中，从未放冰箱。
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发表于 2013-7-17 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感觉是在胶与板之间漏出来的，是不是浓缩胶配得不好？或者是楔子没插紧，胶板里面进空气了
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发表于 2013-7-17 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不是漏在胶与板之间。

因为脱色后发现空白泳道也出现了蛋白。纯化的单一条带的蛋白也出现了杂带。

苦恼中..........................
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duoduo[使用道具]
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发表于 2013-7-17 11:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是所有的泳道出现同样的杂带吗？电泳缓冲液污染了没有？空白泳道也出现条带，一般要么是别的孔上样时溢孔了，要么是电泳缓冲液污染了，缓冲液母液、容器、电泳槽都仔细检查看看。
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131415[使用道具]
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发表于 2013-7-19 09:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
每次电泳缓冲液都现用现配，一次性使用。电泳槽，都用去离子水冲洗。

关键是“漏样”这个现象怎么解释？！！
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发表于 2013-7-19 09:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
样品是什么？也有可能是样品的问题
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发表于 2013-7-19 09:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 箭头儿 于 2013-7-19 09:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
样品是什么？也有可能是样品的问题

大肠杆菌表达的蛋白
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