希望我以下的原创对那些刚刚接触气相，刚刚接触顶空进样的新手有些帮助，谢谢
再简单介绍一下，关于有机残留物检测的一些问题。由于我们在开发这种中成药在进行药物纯化的过程中使用了大孔树脂，但由于大孔树脂本身含有一定量的有机残留物，影响了药品和食品的安全性，因此SFDA规定必须对其残留物进行检测，并对其限度进行了规定：正己烷为290ppm，苯为2ppm，正癸烷为5000ppm，甲苯为890ppm，二甲苯(对、间、邻三种异构体的混合物)为2170ppm，苯乙烯，二乙烯苯参照国家食品药品监督管理局药品评审中心的一般要求为20ppm。
二、实验内容
1、试剂、仪器
试剂：正己烷、苯、甲苯、二甲苯(对、间、邻)、苯乙烯均为气相色谱标准品，纯度为99.5%，二乙烯苯为SIGMA公司提供，纯度为80%；N，N-二甲基甲酰胺(DMF)为分析纯；水为双蒸水。
供试品：中药六类新药(自制) 仪器：安捷伦6890N气相色谱仪，FID检测器，安捷伦7694E，G1883型顶空进样器，石英毛细管柱：HP-INNOWAX(30 m×0.25 mm，0.25 μm)。
图：
2、色谱方法的建立
2.1色谱条件的选择
同时测定沸点相差较大的待测物，需采用程序升温。通过对不同升温条件的考察表明，起始温度过高，不利于高沸点有机残留溶剂的分离；起始温度过低，有机残留物检测方法时间太长，不利于样品的分析测定。另外，对程序升温的速率也进行了选择。本试验中由于二甲苯同分异构体的沸点较接近，因此在升温过程中此段升温速率有所降低，使各待测物达到完全分离。因此选择了以下条件：
检测器：FID检测器，温度250 ℃；进样口温度200 ℃；柱温：程序升温，初始温度50 ℃（2 min），以5 ℃/min的速率升至80 ℃，再由80 ℃以10 ℃/min 的速率升到160 ℃（2 min）；载气：高纯氮，流速0.5 mL/min。
2.2顶空自动进样条件的选择
由于同时测定沸点相差较大的8种有机溶剂，测定中发现顶空温度、顶空加热平衡时间及顶空瓶内压对各溶剂峰的峰面积影响较大，因此考察了顶空平衡温度分别为80，85，90 ℃，平衡时间分别为30，40，50，60 min及顶空瓶内压6、8、10、13、15psi时各成分的出峰情况，结果表明顶空平衡时间在90 ℃，顶空平衡时间60 min，顶空瓶内压8psi时各峰响应最大，确定顶空条件为：平衡温度90 ℃，顶空平衡时间60 min，顶空瓶内压8 psi。平衡时间60 min，加压时间0.5min，定量环(1 mL)填充时间0.06 min，进样时间1 min。
顶空进样器
顶空进样瓶
有很多规格，我们的是10ml和20ml
垫片
压顶空瓶盖的东东
被起起来的瓶盖
因为铝盖没有了，所以大家就凑合看这个吧，嘿嘿
2.3 溶液的配制
2.3.1溶剂的选择
分别考察了丙酮、乙酸乙酯、水杨酸甲酯为溶剂，结果显示均有杂质峰干扰待测物的测定。后考虑选择沸点较高的溶剂二甲亚砜或DMF，以避免对各待测物的干扰，但因为二甲亚砜毒性较大，故选择DMF作为有机溶剂。由于中成药中除含有多种中药成分外，还含有辅料，为减少样品基质效应，溶剂必须尽可能溶解样品。经试验，单一的DMF水溶液对样品的溶解度优于DMF水溶液的，有助于储备液的保存。以兼顾对样品的溶解和灵敏度为原则，选用2%DMF的水溶液为溶样溶剂，结果显示不干扰待测物的测定。
2.3.2 内标溶液的配制
精密吸取一定量乙苯，DMF为溶剂，定容到50ml量瓶中作为储备液；吸取一定量内标储备液，用水稀释配制成浓度为1.0 μg/mL的内标溶液，摇匀，待用。
2.3.3 对照品溶液的配制
精密吸取正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯标准品适量，置于同一25mL量瓶中，DMF溶液定容，摇匀，得储备液。取储备液0.5 mL置25mL量瓶中，以内标溶液定容，制成含正己烷、甲苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯各20.0 μg/mL和含苯2.0μg/mL的混合溶液，作为对照品溶液。精密吸取2.0 mL水和5.0 mL对照品溶液，置20 mL顶空瓶中以PTFE-硅胶垫和铝盖密封，待测。
2.4 专属性试验
经筛选，溶剂2％DMF水溶液不干扰待测溶剂正己烷、苯、甲苯、乙苯（内标）、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯及二乙烯苯的测定，样品中杂质峰不干扰各待测溶剂，说明本法专属性强，结果见图
1．正己烷 2．苯 3．甲苯 4.乙苯5．对二甲苯 6．间二甲苯7．邻二甲苯 8．苯乙烯 9．DMF 10-13．二乙烯苯
细心的版友有可能会问，为什么二乙烯苯有4个峰——
那是因为高纯度的二乙烯苯对照品需在低温下保存，且提纯难度大，所以我用的是较低纯度(80％)的二乙烯苯对照品。其在气相色谱图上表现为4个色谱峰，通过测定记录各色谱峰面积，并计算各色谱峰所占的百分比，对其进行峰位的确定，结果表明，3号峰面积占 52.7%，为间二乙烯苯，4号峰占24.02，为对二乙烯苯，3，4号峰共占76.7%，与80%的二乙烯苯的检测报告基本相符，因此确定出峰顺序靠后的2个较大的色谱峰为二乙烯苯，所以用这两峰的峰面积之和作为定量依据。
2.5 线性关系考察
精密吸取对照品储备液0.3，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，置25mL量瓶中，加入内标溶液适量，双蒸水定容，摇匀，得系列对照品溶液。制备顶空样品，测定。以各待测物色谱峰面积(Ai)与内标峰面积(As)之比(Ai/As)为纵坐标，各组分浓度C(μg/mL)为横坐标，进行线性回归。
2.6 精密度试验
取混合对照品溶液连续进样六次，正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯的RSD分别为4.5%，3.5%，0.8%，0.9%，1.5%，2.3%，2.3%，2.1%，均小于5.0％。
2.7 加样回收率试验
精密称取0.25 g样品共10份，分别置25mL量瓶中，其中9份依次加入0.4，0.5，0.6mL的对照品储备液，加入相应浓度的内标储备液，双蒸馏水定容，超声1 min，测定。各取5.0 ml对照品溶液于20ml顶空瓶中，依次加入双蒸馏水2.0 ml，密封。另一份加入7.0 ml相应浓度的DMF水溶液，密封，超声1min，测定，用内标法计算结果如下：正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯的回收率分别为104.4%，117%，107.6%，102.0%，104.2%，103.2%，105.5%，99.7%。
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本帖最后由 Erica2088wr 于 2010-1-25 10:28 编辑 ]
