小中大【求助】请教一下blue silver胶体考染的问题
打算做blue silver胶体考染,先是看了一下文献(Blue silver: a very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis)。
按照文献里面的做法(0.12%考马斯亮蓝G250、10%硫酸铵、10%磷酸、20%甲醇)顺序加入:
20ml磷酸
20g硫酸铵
0.24g考马斯亮蓝G250
去离子水定容至160ml
一边搅拌一边加入甲醇定容至200ml
最后发现硫酸铵全部析出来了,而且搅拌无法溶解。染色的时候里面全是一个个黑色的颗粒。
然后向实验室的师兄请教了一下,按照他的方法又配了一遍
先将58ml85%的磷酸加入42ml去离子水中
再称取0.6g考马斯亮蓝G250染料加入100ml甲醇中,搅拌。此时发现染料不能充分溶解,烧杯底部大概有20ug左右的粉末。
称取50g硫酸铵加入100ml去离子水中,磁力搅拌器搅拌溶解。
然后把G250甲醇溶液一边搅拌一边缓缓倒入上面配制的硫酸铵溶液中,此时感觉溶液变得像糖浆一样黏稠,并且溶液表面出现金属光泽。
然后再把混合溶液一边搅拌一边倒入上面配制的磷酸溶液中。去离子水定容至500ml。此时染液均匀,感觉瓶底没有沉淀。
然后将染液避光放置四小时后染色时发现染液里面还是有大量黑色不溶颗粒,虽然装在瓶内液体颜色很深,但是染液本身的颜色却比较浅。倒入染色盘中就发现黑色主要是这些黑色颗粒造成的,染液本身为浅墨绿色。
求各位熟悉silver blue的大大指导一下怎么配制染液吧。废了太多染料了。不胜感激。