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标题:【求助】请教一下blue silver胶体考染的问题

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【求助】请教一下blue silver胶体考染的问题


打算做blue silver胶体考染,先是看了一下文献(Blue silver: a very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis)。
按照文献里面的做法(0.12%考马斯亮蓝G250、10%硫酸铵、10%磷酸、20%甲醇)顺序加入:
20ml磷酸
20g硫酸铵
0.24g考马斯亮蓝G250
去离子水定容至160ml
一边搅拌一边加入甲醇定容至200ml

最后发现硫酸铵全部析出来了,而且搅拌无法溶解。染色的时候里面全是一个个黑色的颗粒。

然后向实验室的师兄请教了一下,按照他的方法又配了一遍
先将58ml85%的磷酸加入42ml去离子水中
再称取0.6g考马斯亮蓝G250染料加入100ml甲醇中,搅拌。此时发现染料不能充分溶解,烧杯底部大概有20ug左右的粉末。
称取50g硫酸铵加入100ml去离子水中,磁力搅拌器搅拌溶解。
然后把G250甲醇溶液一边搅拌一边缓缓倒入上面配制的硫酸铵溶液中,此时感觉溶液变得像糖浆一样黏稠,并且溶液表面出现金属光泽。
然后再把混合溶液一边搅拌一边倒入上面配制的磷酸溶液中。去离子水定容至500ml。此时染液均匀,感觉瓶底没有沉淀。
然后将染液避光放置四小时后染色时发现染液里面还是有大量黑色不溶颗粒,虽然装在瓶内液体颜色很深,但是染液本身的颜色却比较浅。倒入染色盘中就发现黑色主要是这些黑色颗粒造成的,染液本身为浅墨绿色。

求各位熟悉silver blue的大大指导一下怎么配制染液吧。废了太多染料了。不胜感激。
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一时半会也等不到硫酸铝了。
这种少用的试剂估计又要等差不多一个月才能到。
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自顶一下,感觉做blue silver的大大还是挺多的。没有谁可以指导一下吗?
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1:取 42ml 纯水,58ml H3PO4(85%)烧杯中混匀,再称取 50g 粉末状
(NH4) 2 SO 4 倒入烧杯(边搅拌边加),搅拌至完全溶解,可根据情况适量加一些水帮会组溶解。
2:加入 0.6g G-250 长时间搅拌,最后倒入用水定容到 400ml 。
3:量取 100ml 甲醇,边搅拌边加入,搅拌均匀。

这个是我原来用过的500 ml 染液配置方法 。

G250是很难完全溶解的,会有颗粒状不容物(应该主要就是g250),一般都是搅拌子搅拌过夜。

整体颜色也是有些墨绿的感觉,不像R250那种蓝。(这个没有和其他实验室对过,不知道是不是就是墨绿的)

供参考!
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也就是说先溶解硫酸铵和染料,最后加入甲醇。
并且搅拌过夜

回头试试。谢谢了
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悲剧了,搅拌了整整36小时都不容。溶液内还是大量黑色颗粒。久置还会沉淀,染液颜色变浅。

更诡异的是拿这种染液染胶会在胶边缘留下云雾状的深染斑块,脱色不能消去......

17cm的胶苦于考染灵敏度太低的问题。要在100ul的样品中包含2-3mg的蛋白真心让人心烦。所以一直想试试blue silver。现在连染液都配不出来,让人相当纠结。

请各位做过的大大多指导指导......
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有条件的话最好用进口的试剂。国产的纯度不够高,也是导致难溶的一大原因
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用的amresco进口分装。
用乙醇和醋酸配制普通考染液溶解起来毫无问题的
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放置两小时后的染液。明显沉淀了。液体部分颜色相当浅。染色之后胶连背景色都染不出来


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