蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】跑SDS-PAGE的电泳缓冲液需要什么水来配制

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 17  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】跑SDS-PAGE的电泳缓冲液需要什么水来配制

lgm[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75381
精华 1
积分 374
帖子 383
信誉分 102
可用分 2781
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
1

发表于 2013-7-22 12:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】跑SDS-PAGE的电泳缓冲液需要什么水来配制

跑SDS-PAGE的电泳缓冲液需要什么水来配制，我以前都用一馏水配制，但是有时配制好的电泳缓冲液比较混倒入电泳槽中，都看不清楚琼脂糖封底的下面有没有气泡。最近实验室有人用给细胞配液用的二馏水配制缓冲液，很清澈，跑的电流电压好像也没受什么影响啊，不是说电泳时需要有离子的吗，二馏水里基本是什么都没有了啊。另外，电泳时电流与什么有关，我跑电泳时同样的电压但是电流都不相同，而且现在电流没有以前大了电泳时间也延长很多，不知道为何？
顶部
831226[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79782
精华 0
积分 770
帖子 1240
信誉分 100
可用分 6976
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
2

发表于 2013-7-22 12:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室配试剂都是用三蒸水，所以跑胶的缓冲液也是用三蒸水来配的，估计二蒸水也可以，但一蒸水就有点太粗糙了，^_^。电泳是让带电粒子在电场力的作用下移动，SDS-PAGE电泳是使蛋白质分子周围包绕SDS，带上负电荷，在外加电场的作用下向正极泳动而完成的，并不是靠外加溶液中离子实现的。电流与胶的电阻有关，由于电泳时产热等原因其电阻会发生变化，所以一般电泳仪都有恒压及恒流的选择。
顶部
jrwyyplt[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79380
精华 1
积分 406
帖子 488
信誉分 102
可用分 3193
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
3

发表于 2013-7-22 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“电泳缓冲液需要什么水来配制”——不知道你的“一馏水”“二馏水”什么概念，能用好的就用好的呗，又不是什么很贵的东西。
"有时配制好的电泳缓冲液比较混"——这太狠了吧，没溶解？？
“不是说电泳时需要有离子的吗，二馏水里基本是什么都没有了啊”——你的电泳缓充液里不是有：tris和甘氨酸嘛。
“电泳时电流与什么有关”——很多的因素可以影响电流。缓冲液的ph，重复使用的次数，胶，蛋白量。。。。

试验前看些基本的试验原理吧，园里很多这些知识的。。。
gook luck！
顶部
avi317[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74131
精华 0
积分 566
帖子 811
信誉分 100
可用分 4896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态 离线
4

发表于 2013-7-22 12:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

使用超纯水即可
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
5

发表于 2013-7-22 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想你说的混，不会是一直那么混吧，是不是新配置的缓冲液了？要是刚配置好的，景之一会就好了。
电流不稳定是很正常的，本身作的就很粗糙，上样总量，样品中的离子浓度，电泳槽的洁净度，凝胶中的离子浓度。如果差别不是很大，没有必要深究的；唯一例外的是你的板子和电泳槽之间有漏液的情况，记得补充上极缓冲液，你说你的电泳时间也长了，很可能是这个原因。
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
6

发表于 2013-7-22 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上面有人用超纯水配缓冲液，太夸张了吧，你是不是用超纯水配电泳缓冲液呀，你们老板是不是钱多得没处花了，如果自己不是老板请千万不要让老板知道你用超纯水跑普通page胶，请不要误导小弟弟小妹妹。
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
7

发表于 2013-7-22 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们几乎天天跑胶用的都是单蒸水，也叫去离子水，跑得很好，不需要二蒸三蒸，没必要，缓冲液混也不一定是水的事，可能同试剂有关，我们原来都是自己配的缓冲液，质量不是很稳定，现在我们用一种袋装干粉，一袋定容到500毫升用转子搅十分钟就非常清亮，可以试试。
顶部
DDD[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73222
精华 1
积分 587
帖子 790
信誉分 102
可用分 4768
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
8

发表于 2013-7-22 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

几点看法:
1.配制电泳试剂用水蒸馏水就可以了就是单蒸水,如果条件允许的话,可以只用更好的当然纯水是最好了;
2.新鲜配制的不会浑浊,估计楼主所说的浑浊应该是说在4度冰箱里取出时,因为sds在温度较低的时候会出现浑浊,使用前最好将其恢复到室温;
3.电泳缓冲液使用次数不宜太多否则会因为电泳缓冲液离子组成产生变化,导致电泳效果差;
4.关于水的问题:一般实验室都会有蒸馏水,双蒸水,其实双蒸水就能满足大多数实验室的要求,纯水才是所谓的去离子水
顶部
fei1226com[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79957
精华 0
积分 599
帖子 898
信誉分 100
可用分 5286
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
9

发表于 2013-7-22 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可能是刚配完电泳缓冲液马上就使用了吧？我每次配10X电泳缓冲液，摇上一通让溶液混匀，此后刚开始的一段时间里溶液是非常浑的，这是SDS给弄的，呵呵，我上午配制完下午去实验室的时候溶液就很清澈了。稀释成1X的时候慢慢地、轻轻地摇匀就不会有很多泡泡，也不会变浑了。
此外，SDS在低温下会析出，冬天装10% SDS溶液的瓶子底部就会出现一坨白坨坨。
配制SDS-PAGE的电泳缓冲液就用蒸馏水就可以了，没有必要使用超纯水。另外，电泳时需要的离子不是由水中原来混有的杂质离子提供的。
电泳缓冲液可以重复使用，不过重复次数不要多。
顶部
kuaizige[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76978
精华 1
积分 526
帖子 707
信誉分 102
可用分 4338
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
10

发表于 2013-7-22 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1 单蒸馏水、双蒸馏水都可以，没必要用超纯水。
2 电泳缓冲液可以重复使用，不过重复次数不要多。
3 SDS溶液室温存放即可，一般不出现浑浊。
4 电泳时把电泳槽放在盆子里，在电泳槽周围放上冰降温，
可以基本保证恒流。

我就是这样跑PAGE，结果very good! Please try!
Good luck!
顶部
 17  1/2 12››