蛋白质与蛋白组学

用Ni sepharose 6 fast flow纯化His-tag 蛋白，刚开始做，先做了咪唑浓度梯度的优化，用了20，60，100，200，300mM的咪唑浓度洗脱，但看了蛋白电泳图，还是找不到合适的咪唑浓度，20-200之间都有目标蛋白和杂蛋白出现
电泳跑的不好：????
请大家帮助分析分析，不是应该在低咪唑浓度洗脱不下目标蛋白吗，而我的结果是都能洗出来，而100和200mM更多一些，并且有两个条带，很不解啊！谢谢大家了~

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你试一下先用含10mM Binding Buffer 平衡一下柱子，降低一些非特异性吸附，然后重新梯度洗脱测试，如50，100，150，200，300mM看看

我刚开始做，也不是很懂，我是想200mM下还是有杂蛋白，这样纯化出来的蛋白不纯啊
而且目标蛋白在60mM时就开始被洗下来了，这样正常吗？

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前面杂蛋白都洗出来了，所以你200mM看上去相对较纯，先将样品调到咪唑浓度10mM左右，再重新进行梯度洗脱试试吧。