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一、制胶
制备SDS聚丙烯酰胺凝胶，含0.1％明胶的8％分离胶，5％堆积胶
1 选择两块玻璃板（注意厚度1.0mm or 0.75mm）仔细夹好，装在支架上，并固定好。
2 配制separating gel (10ml,两块)
明胶溶液(0.1g/66ml) 6.6ml
40% Acrylamide 2ml
3M Tris-HCl (PH 8.8) 1.25ml
10% SDS 0.1ml
10% APS 75ul
TEMED 10ul
混匀后，倒入两块板中，上压1ml dd-water，静置30min~1hr(天气热时胶凝固快，冷时慢)，待肉眼可见胶与水之间有水平线存在时，将水倒出，准备灌制stacking gel。
3 配制stacking gel (5ml,两块)
dd-water 4.1ml
40% Acrylamide 0.47ml
2M Tris-HCl (PH 6.8) 0.31ml
10% SDS 0.05ml
10% APS 75ul
TEMED 10ul
充分混匀后，倒入板内，插上梳子（注意：防止梳子与胶之间残留气泡），静置30min或更长。
样本与RIPA及5*LB混匀后，准备上样。（注意：无需95℃煮5～6min变性）。
三、电泳Running buffer
条件：室温80v；时间约2~2.5hr。
四、洗脱
电泳结束后，凝胶置于洗脱液中洗脱2次，每次45min。
五、漂洗
漂洗液漂洗2次，每次30min。
六、孵育
凝胶置于孵育液中37℃孵育18h。
七、染色
孵育结束后经考马斯亮蓝染色液染色3hr。可显示出MMP-2和MMP-9位于蓝色背景上的透亮带。
八、脱色
脱色液A(15-20min)、B(15-10min)、C(5-10min)
A液 B液 C液
甲醇 60ml(30%) 40 ml(20%) 20ml(10%)
乙酸 20ml(10%) 20 ml(10%) 10ml(5%)
去离子水 120ml 140ml 170ml
