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标题:【求助】蛋白定量方法的哪个好？

PINK[使用道具]
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发表于 2013-7-26 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白定量方法的哪个好？


现在的文献测定蛋白基本不用lowry法了，但我改用考马斯亮蓝G250法（文献和参考书都极力叫好的方法）连标准曲线都有很大的问题，还是lowry稳定可靠。我们科里好几个人都发现G250法不好，是什么原因呢？我们用的水是去离子水，好长时间没有换柱子了，我发现其PH值达到9甚至10左右，是不是我们的水有问题？还是该方法就没有那么好？
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DONT[使用道具]
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发表于 2013-7-26 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我认为G250方法还没有lowry法可靠，不过用不同的方法还要根据你测的东西不同而定，我以前实验要求不严格，只是大概定一下量所以就用过G-250法，后来用bio－rad公司的蛋白质定量的一个试剂盒，不是很贵，测定方法很简单，就是利用lowry法，你为什么说这种方法过时了呢？我记得上大学时老师们就说G250不如lowry法准确呀。
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30moonriver[使用道具]
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发表于 2013-7-26 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
G250很快，可在低浓度蛋白下就不灵光了
lowry比较麻烦，精度高些
还有bca法，可信度很高的，不过觉得贵了些。
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2013-7-26 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实用那种方法，还要看你的设备，我们实验室的分光光度仪很准确，我做EMSA，测核蛋白，标准曲线的Rsq是0.9998，结果十分稳定。lowry法麻烦了一些。一般的分光光度仪用G250测起来稳定性不好，我也试过，Rsq只有0.8几。
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caihong[使用道具]
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发表于 2013-7-26 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
G250指的是什么意思
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duoduo[使用道具]
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发表于 2013-7-26 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

G250就是——考马式亮蓝G250染色测定蛋白含量方法——大家简称了
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发表于 2013-7-26 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家是做实验的，不是写书的，所以在这里讨论才真可得到较为真实的结果。我估计我的原因可能是：我用lowry法时为节省试剂采用减半的办法，标准曲线也挺好。但G250减半就不行了，估计正如楼上战友所说，G250定微量蛋白要差一些，就是说它不如lowry法准确。丁香园万岁！！
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发表于 2013-7-26 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

G250法也叫bradford法。我们实验室一般都用这方法，要说测微量蛋白，它要比双缩脲法灵敏度要高的呀。作标准曲线时，不妨多取几个点。我测得标准曲线Rsp可以达到0.995以上。
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发表于 2013-7-26 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要知道G250法要求是每次测蛋白都得重新做标准曲线的。
还有，有些去污剂是可以干扰的。
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发表于 2013-7-26 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每种方法都是有局限性的，G250和lowry都会受到一些如去污剂或还原剂的影响的，所以要根据具体情况选择不同的方法。
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