小中大完全可以,楼主所说共表达不是融合表达,是共同表达。
如果是真核表达,把两个表达框构建到一个载体上进行转化或转染就可以实现共表达了,有一些现成的用于共表达的载体。动物细胞中还有IRES载体可用于共表达。
如果是大肠杆菌或其他原核生物共表达,可以构建两个顺反子到一个载体上,但是步骤可能会比较多,载体比较大,可能会影响质粒复制而影响表达效果。而如果两个顺反子有较大同源部分,则还需要考虑因重组导致的不稳定。
Novagen新出的一款载体pETDuet-1,使用两个T7启动子、两个RBS分别表达两个基因,不过只有一个T7终止子,可以满足楼主的需要。并附质粒图谱。