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标题:[未解决]DPPH用无水乙醇溶的，然后实验出现了絮状沉淀。

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
grace![使用道具]
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发表于 2013-7-28 21:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DPPH用无水乙醇溶的，然后实验出现了絮状沉淀。

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今天做了多糖抗氧化测DPPH的实验，问题很多：
1、DPPH用无水乙醇溶的，然后实验出现了絮状沉淀。
2、空白组吸光度超过了1。
3、加了多糖样液的部分样品吸光度超过了空白。

多糖制备的时候是用醇沉的，多糖不溶于醇，DPPH又是用无水乙醇配的，正常情况下是会沉淀的吧？？？有没有办法解决这些问题呢？？？求教大神们了，很急啊！！
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巅峰时刻#-#[使用道具]
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发表于 2013-7-28 21:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也有用DPPH自由基来测样品的抗氧化能力，浓度为0.1mM的DPPH无水乙醇溶液在517nm下吸光度是0.9以上，所以不加抗氧化剂的空白对照中DPPH的浓度为0.1mM较好。我是用0.2mM的DPPH溶液和待测样品同体积混合
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hero_b[使用道具]
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发表于 2013-7-28 21:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
出现絮状物应该是溶解问题：可能你的糖提取液跟DPPH溶液不能混溶，也可能反应产物不能很好溶解，还可能。。。
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迷糊小鬼[使用道具]
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发表于 2013-7-28 21:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
浓度为0.1mM的DPPH无水乙醇溶液在517nm下吸光度由于仪器、参比等客观条件也可能会大于1，我实验数据也有稍大于1的
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apple_danny[使用道具]
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发表于 2013-7-28 21:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
吸光度大于空白，可能是因为你体系形成的絮状物造成的干扰，原则下，分光光度法要求待测液是溶液（也就是要澄清透明的）。希望对你有帮助。
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发表于 2013-7-28 22:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的样品是用醇沉的，所以我觉得你可能不适合用DPPH这个方法测量，因为DPPH要么用甲醇溶解要么用乙醇溶解来制备，不知道你换成甲醇还会不会出现这个问题
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发表于 2013-7-28 22:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
考虑乳化剂是一个解决的办法，我见过的有SDS的，环状糊精的，也有你说的DMSO的，如果还用分光，波光应该还是原来的波长，因为原理是没变的，不放心的话，做个波长扫描就行了，很方便的
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80年代的人[使用道具]
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发表于 2013-7-28 22:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可以考虑看能不能更换样品的溶剂，比如丙酮。如果都不行的话，可以考虑换方法啊，测清除自由基能力的方法很多的，不一定局限于这一种。
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发表于 2013-7-28 22:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道你是不是要用vc做标曲，如果你这三个浓度的清除率都是90%多，那说明较低浓度的VC的时候基本就把自由基清除差不多了，所以你可以考虑把浓度继续稀释，具体浓度，你试吧。
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发表于 2013-7-28 22:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
絮状沉淀应该是多糖吧，多糖不是水提醇沉么呵呵，空白组超过1，是不是因为你dpph浓度过高呢？加了样品的吸光度超过空白？那可能是你多糖不纯的，是不是里面参杂了别的色素之类东西呢......
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