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标题:[未解决]也有峰，但是纯品太少，没办法富集求助

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
80年代的人[使用道具]
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发表于 2013-7-28 22:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也有峰，但是纯品太少，没办法富集求助

转载
现在在做食用菌子实体多糖的分离纯化，我用的是DEAE-52的纤维素柱，用0.05到0.5的NaCl 梯度洗脱，1.25ml/min，上样量是1mg/ml 的多糖10ml，每管收集5ml，过了两次，也有峰，但是纯品太少，没办法富集，还想拿到纯品，怎么办呢？
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be!smile[使用道具]
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发表于 2013-7-28 22:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多糖醇沉的时候确实有两层上面漂浮的一层是胶体状的，下面一层是沉淀。胶体状的我没做过，我做的是下面的沉淀
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发表于 2013-7-28 22:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
柱子的规格。如果想大量的制备，当然是选择稍稍大的柱子。直径在2.0cm以上。你上样量。可以稍稍加大点多糖的上样量。
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发表于 2013-7-28 22:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多糖的浓度。你上样上了10ml。尽量减小上样体积，提高多糖浓度。
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艾玛@加油[使用道具]
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发表于 2013-7-28 22:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
梯度洗脱的浓度选择。0.05-0.5这个浓度，你是随便选择的。什么浓度是最适合的，是需要实验依据的。你有两种方案选择：1、阶段性梯度洗脱：洗脱液的浓度从0、到2mol/L，选择适当的不同浓度，有低到高依次洗脱并分别收集。2、线性连续性梯度洗脱：洗脱浓度是从0-2mol/L，成线性、连续性洗脱，这种线性浓度你可以在去离子水中一边接入柱子，一边同时匀速加入高浓度的洗脱液2mol/L，同时不断搅拌（磁力搅拌器），使溶液浓度从0慢慢逐步提高。
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=心晴=[使用道具]
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发表于 2013-7-28 23:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你要对以上收集的收集液，逐管或者隔管检测多糖含量，从而来确定主峰的位置。以便选择适当的洗脱浓度，从而优化实验参数。
细心、耐心加毅力。
祝你试验成功。
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不化妆的lay[使用道具]
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发表于 2013-7-28 23:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非应助，自己也是在学习中，DE52不耐压，如果加大盐离子浓度可以不？不梯度洗脱，直接用一较高盐离子浓度洗脱液洗脱
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发表于 2013-7-28 23:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做过氧化值时，淀粉指示剂的加入时机对分析结果的影响是比较大的
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集贤阁[使用道具]
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发表于 2013-7-28 23:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
直接做油还是做食品中提取出来的油？如果是后者的话提取过程很重要，前者的话样品做前摇过吧，实验应该比较简单，我做过很多年火腿中过氧化值和酸价，对提取好后的油平行性很好。
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哈达[使用道具]
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发表于 2013-7-28 23:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这很正常，真菌多糖很多都是胶体，建议加热或盐溶液溶解，每次用一种洗脱液都有一个峰也很正常，主要是看哪个峰是主要成分，不知道你的柱子规格，一次进样10mg是有点少，需要很长时间才能得到足够的量啊，呵呵
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