蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】明胶酶谱结果有三四条清晰的条带？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 11  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】明胶酶谱结果有三四条清晰的条带？

101010[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75120
精华 0
积分 517
帖子 734
信誉分 100
可用分 4490
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
1

发表于 2013-7-30 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】明胶酶谱结果有三四条清晰的条带？


最近在做明胶酶谱实验，第一次做还好，在72KD和92KD各显示出条带。后来又做了一次不知为什么在34KD和49KD之间又多了两条带，而且还很清晰，现把图片发上去，请各为高手指教一下。谢谢！
最上面那一条比较浅的为92KD，中间最亮的一条为72KD，最下面的两条处于34KD和49KD之间


查看积分策略说明
附件
2013-7-30 16:20
44387961.jpg (9.75 KB)
 
顶部
mamamiya[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72974
精华 0
积分 653
帖子 986
信誉分 100
可用分 5763
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
2

发表于 2013-7-30 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好，我做了很多次都没出来结果，我想看一下你的配方和试验方法，还有你觉得在实验中要注意什么？能回复万分感谢！谢谢！
顶部
JK.jon[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75188
精华 1
积分 528
帖子 652
信誉分 102
可用分 4146
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
3

发表于 2013-7-30 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有可能是蛋白酶部分降解了
顶部
gemei0115[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76303
精华 0
积分 530
帖子 658
信誉分 101
可用分 4191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
4

发表于 2013-7-30 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白酶降解成多段了，但这几段的催化结构域还在，所以还保持活性。建议，用保存好的，新的蛋白，再试试
顶部
greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
5

发表于 2013-7-30 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也做明胶酶谱试验，做了几次都没有任何条带，现在急于找个阳性对照来验证下是否是试验过程的问题，还是就是所测标本的MMP-9表达水平低下造成的。能否给我说下这方面的信息和具体做法？不胜感激了！
我的邮箱
顶部
jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75366
精华 0
积分 468
帖子 574
信誉分 101
可用分 3711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
6

发表于 2013-7-30 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教一下，做明胶酶谱分析法跑电泳的仪器用western blot的可不可以？还有分离胶和浓缩胶的配方能否告知？各需几毫升？
顶部
kswl870[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77250
精华 0
积分 559
帖子 755
信誉分 101
可用分 4621
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
7

发表于 2013-7-30 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以进行WB啊
配胶方法与gelatin zymography略有不同
顶部
qhyu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77304
精华 0
积分 705
帖子 1049
信誉分 100
可用分 6111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
8

发表于 2013-7-30 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

protocal请参考cuturl('http://protein.dxy.cn/bbs/topic/18969485')
顶部
tangxin_80[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79896
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4621
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
9

发表于 2013-7-30 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

lz的条带好漂亮啊，能不能请教几个细节，上样量每孔多少ug，明胶的最终浓度，还有最后的孵育时间是多久啊，我最近也在做，用的是细胞浓缩上清，感觉整张胶从上到下都有好多复染带啊，不像你的那么单一清晰。。。。郁闷
顶部
caihong[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
10

发表于 2013-7-30 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问一下,我染色,脱色出来的胶的条带都是蓝色的.说明MMP9没有分解明胶底物对吧?可能是明胶有问题,或者MMP9复性不充分是吗?我在PAGE胶里加明胶的时候,明胶粉末加水在37度溶解后,感觉溶液不澄清,是不是明胶没溶解充分啊?
顶部
 11  1/2 12››